松杉灵芝多糖的提取、分离和纯化及其生物活性的研究

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本实验以松杉灵芝(Ganoderma tsugae)子实体为原料,通过热水浸提法提取松杉灵芝子实体多糖,采用浓缩、醇沉、流水透析、冻干等过程得松杉灵芝多糖(GT),GT为棕黄色粉末,多糖占56.74%,蛋白质占40.8%,得率为2.1%。对GT进一步分离、纯化和鉴定。采用DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换层析技术将GT分为GTW和GTN两个组分,GTW为水溶性多糖,乳白色粉末,多糖占74.84%,蛋白质占20.4%,相对于生药材的得率为0.5%。经苯酚—硫酸法和Folin-酚法检测同一流出物的多糖与蛋白含量,表明其为共价偶联的蛋白多糖。HPLC检测,GTW为分子量7000-10000Da之间的两个化合物。GTW经SephedexG-100色谱进一步纯化得多糖GTWa,其为乳白色粉末,相对于生药材得率为0.1%。GTWa经HPLC检测,显示其为分子量7896.8Da的均一蛋白多糖组分。GTW红外光谱检测结果显示其为p型糖苷键蛋白多糖。单糖分析表明,GTW 主要由 Man,Glc 和 Gal 组成,峰面积比为 Man:Glc:Gal=56.93:23.30:10.15。我们利用人肝癌细胞株HepG2细胞对GTW的保肝和降血脂活性进行了筛选。结果显示不同浓度的GTW均可以提高酒精损伤的HepG2细胞存活率,同时不同程度的抑制ALT、AST、MDA表达,提高SOD的活性,减少HepG2细胞的凋亡数量,诱导低密度脂蛋白受体LDLR的表达量升高。研究结果显示,松杉灵芝蛋白多糖GTW具有一定的保肝和降脂活性。
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