干扰素-γ对脱落乳牙干细胞增殖和成骨向分化影响的体外研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:raulhanlin
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目的:口腔颌面部外伤、肿瘤、先天畸形等原因可造成颌面部骨组织大面积缺损,严重影响患者的咀嚼功能、发音及外观容貌。以干细胞为基础的组织再生医学,是颌面部骨组织缺损治疗的一个新方向。近年来研究发现,宿主免疫微环境,即免疫细胞及其分泌的炎性细胞因子在组织再生过程中发挥了至关重要的作用,其很大程度上调控干细胞的生物学性能,决定组织再生的疗效。前期研究发现促炎症细胞因子干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)参与调控脱落乳牙干细胞(stem cells from exfoliated deciduous teeth,SHED)体内成骨能力,但具体调控作用未知。本实验拟通过体外细胞实验研究IFN-γ对SHED细胞增殖和成骨向分化的影响,为明确免疫微环境在组织再生中的作用提供依据,为提高以干细胞为基础的骨组织再生疗效寻求新靶点。研究方法:原代分离培养人SHED。流式细胞术检测干细胞表面标记物CD34、CD45、CD73、CD90、CD105的表达,茜素红S、油红O染色和免疫荧光染色等检测其多向分化潜能。用不同浓度的IFN-γ(0、10、50、100、200 ng/mL)处理SHED 3d,CCK8法检测SHED细胞增殖率,流式细胞术及甲苯胺蓝染色检测SHED细胞凋亡比率;用不同浓度的IFN-γ(0、10、50、100、200 ng/mL)预处理SHED后进行成骨诱导,茜素红S染色检测矿化结节形成能力,Western blot检测成骨相关分子Runx2、ALP的蛋白表达水平,评估IFN-γ对SHED成骨能力的影响。实验结果采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果:IFN-γ能够抑制SHED增殖,可能呈现浓度依赖性,IFN-γ浓度越高抑制SHED增殖效果越明显;高浓度IFN-γ(100、200 ng/mL)可以诱导SHED凋亡;高浓度IFN-γ(100、200 ng/mL)可以抑制SHED成骨向分化。结论:IFN-γ诱导SHED凋亡,抑制其增殖和成骨向分化,从而降低以SHED为基础的骨组织再生疗效。调控宿主免疫微环境是提高以干细胞为基础的骨组织再生疗效新的重要靶点。
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