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近年来,随着经济、社会的飞速发展和人口老龄化进程的加剧,中国恶性肿瘤的发病率和死亡率呈上升趋势。癌症给人们的身体健康和社会发展造成了严重危害,因此攻克癌症难关已成为医药及化学工作者当务之急的任务。长春碱(vinblastine,VLB)是由夹竹桃科(Apocynaceae)植物长春花(Catharanthus roseus)中分离、提取出的一种生物碱,是细胞周期特异性抗肿瘤药,已广泛用于多数癌症的治疗。但由于长春碱对机体具有毒副作用、会产生局部刺激,且半衰期短、无靶向性等缺点,使长春碱在临床上广泛长期的应用受到限制。本实验从体内(in vivo)和体外(in vitro)抗肿瘤活性、抗肿瘤作用机制等药理学评价指标对叶酸介导的白蛋白包载长春碱纳米粒(FA-VLB-BSANP)进行抗肿瘤活性评估,从而为长春碱新剂型的研究和开发提供新的研究思路。1.本文采用MTT法检测FA-VLB-BSANP体外抗肿瘤活性。结果显示,VLB及FA-VLB-BSANP对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用最强,且呈时间和浓度双向依赖性,作用细胞48h后IC5o值分别为69.19±7.32pg/mL和60.63±8.38μg/mL。通过FA-VLB-BSANP对细胞生长曲线的影响结果可以看出,FA-VLB-BSANP对细胞增殖能力的抑制作用显著强于VLB组,且抑制作用随时间的延长越发明显。此外,采用倒置显微镜从形态学角度观察VLB及FA-VLB-BSANP作用于SGC-7901细胞后的变化,可以看出FA-VLB-BSANP对细胞增殖抑制作用更加显著。2.采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测VLB、FA-VLB-BSANP对SGC-7901细胞凋亡率的影响。结果表明,VLB、FA-VLB-BSANP处理SGC-7901细胞后会导致细胞凋亡百分率的提高,并在一定的剂量范围内,随药物浓度的增加,引起细胞凋亡百分率的提高。相同浓度的VLB及FA-VLB-BSANP处理SGC-7901细胞后,FA-VLB-BSANP组细胞的平均凋亡百分率较VLB原粉组高。采用吖啶橙染色法检测VLB、FA-VLB-BSANP诱导SGC-7901细胞凋亡导致的细胞形态学变化。结果显示,FA-VLB-BSANP组细胞凋亡信号较VLB组明显,可见数量较多的明显膨胀的细胞及明显的凋亡小体。3.采用Rh123染色,利用流式细胞仪及倒置荧光显微镜检测VLB、FA-VLB-BSANP对SGC-7901细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化的影响。流式细胞仪检测结果显示,SGC-7901细胞经过不同浓度的VLB及FA-VLB-BSANP作用后,可引起线粒体膜电位降低,随着药物浓度增加,低荧光强度部分细胞所占百分比也逐渐增加。且FA-VLB-BSANP诱导癌细胞出现膜电位下降的效果显著好于VLB原粉。倒置荧光显微镜观察结果显示,VLB及FA-VLB-BSANP均能引起细胞线粒体膜电位的降低,且同一浓度时FA-VLB-BSANP比VLB作用细胞后荧光强度减弱的更加明显。4.采用ELISA法检测VLB及FA-VLB-BSANP作用SGC-7901细胞后相关蛋白水平的变化。结果显示,与VLB相比,FA-VLB-BSANP对Bcl-2蛋白下调及Bax蛋白上调的作用更显著。FA-VLB-BSANP组cyclinBi蛋白表达量略高于VLB组,FA-VLB-BSANP对细胞微管的破坏作用略强于VLB,可使更多的肿瘤细胞阻滞于M期。FA-VLB-BSANP对IKB-α蛋白下调及MEKK1蛋白上调作用略显著于VLB。5.采用ELISA法检测VLB及FA-VLB-BSANP对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。结果显示,与VLB相比,FA-VLB-BSANP对MMP-2. MMP-9. VEGF三种因子表达的抑制作用更加显著。6.选择S180荷瘤小鼠来研究VLB及FA-VLB-BSANP体内抗肿瘤活性。实验研究结果表明,VLB及FA-VLB-BSANP组的LDso值分别为24.69mg/kg和28.61mg/kg, FA-VLB-BSANP体内毒性明显低于VLB原粉。当给药剂量为4mg/kg时,VLB和FA-VLB-BSANP的体内抑瘤率分别为79.43%和86.86%。实验结果表明,与VLB原粉相比,FA-VLB-BSANP在小鼠体内具有更好的抗肿瘤活性。综上所述,FA-VLB-BSANP在体内及体外抗肿瘤活性研究中均表现出了更好的抗肿瘤活性。与VLB相比,]EA-VLB-BSANP提高了对肿瘤细胞的抑制作用,增强了对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响,降低了体内毒性。因此,FA-VLB-BSANP是一种高效低毒的VLB纳米制剂,此实验结果对于FA-VLB-BSANP的进一步研究及开发为新药提高了良好的理论基础。