常温体外循环对大鼠海马c-fos基因表达的影响

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目的:通过建立大鼠体外循环模型(CPB),观察常温体外循环对大鼠海马神经元即早基因c-fos基因表达的影响。方法:成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠12只,随机分为假手术组(Sham组,n=6),体外循环组(CPB组,n=6)。两组动物麻醉(10%水合氯醛,350mg·kg-1腹腔注射)后经口气管插管并行机械通气,经右侧上腔静脉置入右心房插管及经右侧颈内动脉置入动脉灌注管,肝素抗凝(500U·kg-1)。CPB组采用常温(36℃以上),经右侧上腔静脉右心房引流,右颈内动脉灌注,灌注流量为(120~150)mL·kg-1·min-1,总转流时间60min;Sham组除了不经历CPB外,其余操作与CPB组相同;实验过程中检测体温、动脉压、动脉血气、电解质和血液稀释度。CPB组于停机后1h、Sham组于手术后2h处死动物,立即断头取脑分离海马组织,左侧海马放入液氮速冻后转入-80℃冰箱保存以供c-fos mRNA检测,右侧海马放入4%多聚甲醛保存以供免疫组织化学方法检测。c-fos检测采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法。结果:1.两组动物生理指标和实验经过:12只大鼠均安全度过外科实验动物过程。各个时间点的两组大鼠的体重、及血气分析指标无明显变化(P>0.05),CPB转流中及停机后K+、Ca2+、HCT、THbc等指标变化较明显(P<0.05),表现为K+、Ca2+、HCT、THbc降低。2.海马HE染色观察Sham组神经细胞数量及形态结构分布正常,椎体细胞呈椭圆形,核仁清楚,未见明显病理学改变;CPB组可见神经元肿胀,出现核固缩和(或)核碎裂的萎缩神经元。3.Sham组海马c-fos仅有少量表达,阳性细胞染色较浅;CPB组大鼠海马c-fos呈高水平表达,染色深,神经元结构清晰,完整,阳性物质均位于胞核内。4.CPB组的c-fos电泳条带变焦明亮清晰,Sham组的c-fos条带却模糊、暗淡CPB组的c-fos/β-action比值大于Sham组(P<0.05),表明CPB组海马的c-fos表达高于Sham组。结论:1.闭胸式大鼠CPB模型可以作为CPB相关研究的理想模型。2.常温CPB可导致大鼠海马损伤。3.常温CPB可导致大鼠海马c-fosmRNA表达增加。4.c-fos可以作为CPB造成脑损伤早期诊断的一个指标。
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