双酚A(BPA)作为全球产量最高的内分泌干扰物之一,在环境中无处不在,并且广泛应用于人们的日常生活中。研究表明大量的BPA被排放到水环境中,对水生生物造成严重的危害。故BPA的影响引起了公众对有关水生生物的健康和可持续发展的关注,特别是对鱼类的影响。以前研究主要集中在BPA作为雌激素对生殖的毒害作用。近年来,有关BPA的暴露对机体脂质稳态的影响逐渐得到人们的关注,然而BPA暴露对脂代谢的影响机制尚不明确。本研究旨在探究双酚A对稀有鮈鲫脂质代谢的影响及其潜在的调控机制。采用半静态方法对5月龄的稀有鮈鲫进行为期3周、4周、6周的BPA(15μg/L)暴露处理。采用GPO-PAP方法检测肝脏和血清中甘油三酯含量;ELISA方法检测ACC、FASN、GPAT1和CPT1酶的活性;qRT-PCR检测肝脏中acaca、acacb、fasn、gpat1、cpt1α和srebp-1c mRNA表达量;利用染色体步移的方法克隆acaca、fasn和cpt1α基因的5’侧翼序列并预测SRE位点和甲基化位点;Western Blot方法检测肝脏中SREBP-1蛋白表达量;CHIP方法检测SREBP-1与acaca、fasn和cpt1α的互作,并用BSP法检测acaca、fasn和cpt1α甲基化状态。获得的主要研究结果如下:1.15μg/L BPA暴露4周后,甘油三酯含量在雌性稀有鮈鲫血清中显著降低,在肝脏中并没有显著的变化,因此本研究推测BPA可能影响雌鱼体内甘油三酯从肝脏输送到血液这一过程。另外3周的BPA处理使得肝脏中甘油三酯含量有上升的趋势,这与肝重和肝体比在BPA暴露3周后显著上升一致;而甘油三酯含量经6周的BPA暴露后显著降低,因此推测随着暴露时间的延长,机体可能起到了负反馈调节的作用。另外,雄鱼组肝脏中甘油三酯含量,在BPA处理3周和6周后,均显著降低,这表明BPA暴露在某种程度上降低了雄鱼体内甘油三酯的积累。2.雄性稀有鮈鲫在BPA暴露4周后,肝脏中CPTI的活性显著上升,这表明BPA暴露可能促进了脂肪酸β-氧化;相反的ACC、FASN和GPAT酶活性上升,表明脂肪酸合成加强;结果还显示肝脏和血清中甘油三酯含量有上升趋势,因此本研究推测在雄鱼中,BPA对脂质合成和脂肪酸β-氧化均有促进作用,但对脂质合成的促进作用更强,导致肝脏和血清中甘油三酯含量均有上升趋势。另外BPA暴露4周后诱导雄鱼肝脏中CPT1酶的活性显著降低,与雄鱼中结果相反,这表明BPA可能对稀有鮈鲫肝脏中脂肪酸β-氧化通路的影响有明显的性别依赖性。3.雌鱼组中,肝脏中SREBP-1前体和成熟形式的蛋白含量在BPA暴露处理3周和6周后分别显著降低和升高,并且基因表达水平与蛋白结果一致,这与acaca和fasn mRNA相对表达水平有一致的趋势。另外,3周和6周的BPA暴露使得在雄鱼处理组中SREBP-1前体和成熟形式的蛋白表达量不同程度的降低,其基因出现类似的结果,同样的这与acaca和gpat1表达水平一致,与cpt1αmRNA表达水平相反。4.SREBP-1可以与fasn、acaca和cpt1α5’侧翼SRE序列结合。在雌鱼中,3周的BPA暴露显著抑制SREBP-1与acaca及fasn 5’侧翼SRE的结合,而6周的BPA暴露极显著促进它与acaca,fasn的SRE结合,这与它们mRNA表达在3周的BPA暴露后下调和6周暴露后上调相对应,因此在雌鱼中,BPA暴露可能通过改变肝脏组织中转录因子SREBP-1与acaca和fasn基因的SRE位点的结合能力而干扰acaca和fasn的mRNA表达。在雄鱼中,BPA处理3周显著抑制了SREBP-1与acaca及fasn 5’侧翼SRE位点的结合,而6周的处理却显著促进了它与这2个基因SRE位点的结合,对于cpt1α基因,3周的BPA暴露显著促进了SREBP-1蛋白与其5’侧翼SRE位点的结合,而6周处理则无显著影响,除了6周BPA处理对acaca的mRNA表达异常外,所有3个基因的mRNA表达调控与相应基因的SREBP-1/SRE的结合强弱有对应关系,因此BPA暴露可能通过干扰雄鱼肝脏组织中转录因子SREBP-1与acaca、fasn和cpt1α上SRE位点的结合对它们的基因表达进行调控。5.在雌鱼肝脏组织中,3周BPA处理使得cpt1a-445和-433 CpG位点的甲基化水平显著提高;另外6周BPA暴露后cpt1a-638和-433 CpG位点甲基化水平降低。综上表明,BPA通过转录因子SREBP-1和甲基化调控acaca、fasn和cpt1α的mRNA表达,从而影响稀有鮈鲫的脂质代谢。本研究有助于理解BPA对活体内脂质代谢的作用,从而为BPA对鱼类的影响提供一些新的见解。