【摘 要】
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背景:肝细胞癌是世界上一种常见的恶性肿瘤,也是肝脏常见的原发性恶性肿瘤。脂肪酸合成酶(FASN)是在人体细胞中一种非常重要的代谢酶,它参与肿瘤形成与进展中的多个步骤,包括
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背景:肝细胞癌是世界上一种常见的恶性肿瘤,也是肝脏常见的原发性恶性肿瘤。脂肪酸合成酶(FASN)是在人体细胞中一种非常重要的代谢酶,它参与肿瘤形成与进展中的多个步骤,包括肿瘤的侵袭和迁移、肿瘤细胞的增殖和存活等。方法:本篇文章通过免疫组织化学实验证实了FASN在肝癌中高表达;然后在肝癌细胞系中利用Transwell实验和划痕实验进一步证实高表达的FASN可以促进肝癌侵袭与迁移;其次我们将FASN siRNA和control siRNA处理后的肝癌细胞系进行FASN相互作用蛋白的免疫共沉淀实验,获得的蛋白样品利用ITRAQ分析(相对和绝对定量蛋白分析),鉴定与FASN相互作用的蛋白质;再然后利用免疫共沉淀实验和免疫荧光共定位分析验证ITRAQ结果;最后蛋白质印迹进一步探索FASN在肝细胞癌中的具体作用机制。结果:1、免疫组化实验证实FASN在肝癌中的表达明显高于肝癌旁的正常肝癌组织;2、Transwell实验证实敲低肝癌细胞系中的FASN可以抑制肝癌细胞系的侵袭,同样划痕实验证实敲低肝癌细胞系中的FASN可以抑制肝癌细胞系的迁移;3、ITRAQ实验筛选出的多种相互作用蛋白,我们选择STAT3(信号转导和转录激活因子3)进行后续实验;4、免疫共沉淀实验和免疫荧光共定位分析证实了ITRAQ结果准确性,即两种方法均证实了FASN与STAT3具有相互作用。5、蛋白质印迹实验证实,当我们敲低肝癌细胞系中的FASN后,STAT3的表达没有统计学意义,而磷酸化的STAT3以及基质金属蛋白酶MMP-9和MMP-2均有一个下降的趋势。结论:我们的实验结果发现,在肝癌中,FASN可能通过与STAT3相互作用,影响STAT3信号转导通路以及MMP-9和MMP-2的表达,从而促进肝癌的进展。
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