南方特色蔬菜(藜蒿和甘薯叶)中多酚的提取及抗氧化成分分离鉴定

来源 :南昌大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:Mijieer
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由于藜蒿和甘薯叶均为南方的特色蔬菜,且有利用率低、生物活性好、活性成分提取有待进一步优化、详细的抗氧化成分不明确的特点。因此,本文以藜蒿和甘薯叶为南方特色蔬菜的典型代表对南方特色蔬菜中多酚类化合物的提取方法进行筛选,并采用HPLC-QTOF-MS2技术对其抗氧化成分进行综合分析。旨在通过探明藜蒿和甘薯叶的抗氧化潜力并鉴定其中抗氧化成分,为藜蒿和甘薯叶,以及其他南方特色蔬菜中生物活性成分的筛选、分离鉴定、生物活性研究以及高值化利用提供提供技术参考和理论依据。现将主要研究结果归纳如下:(1)藜蒿的50%乙醇提取物具有最高的总酚(17.03 mg GAE/g DM)、总黄酮含量(11.11 mg RT/g DM)和最强的DPPH·清除能力和Fe3+还原能力。但水提物具有最高的总糖含量(102.43 mg Glu/g DM)、HO·清除能力和Fe2+螯合能力。采用HPLC-QTOF-MS2技术从藜蒿中总共鉴定或初步鉴定27种化合物,包括11种有机酸、1种氨基酸和15种脂肪酸。其中26种化合物为首次在藜蒿中鉴定,15种脂肪酸为首次在蒿属植物中鉴定,Quinic acid、3-caffeoylquinic acid(CQA)、5-CQA和3,4-dicaffeoylquinic acid(diCQA)、3,5-diCQA为藜蒿中的主要酚酸,同时首次描述了9,12,13-trihydroxyoctadecenoic acid等6种化合物的MS/MS裂解行为。以上结果表明,50%乙醇是提取藜蒿多酚的适宜溶剂,藜蒿可以作为开发功能性食品添加剂和保健食品的的一种潜在抗氧化剂资源。(2)在DHPM、微波、超声波、高温(HT)和浸提(MA)五种提取方法中,微波对藜蒿多酚(40.30μg GAE/mg Extract)和黄酮(37.75μg RTE/mg Extract)的提取效率最好,且提取物具有最强的体外抗氧化能力。酚酸是藜蒿中的主要抗氧化成分,总共对藜蒿不同方法提取物中的10种酚酸进行了定量分析。不同提取物中的酚酸种类大体相似但各酚酸单体的含量不同,5-CQA、3,5-和1,5-diCQA为藜蒿中含量最高的酚酸,微波提取物中的diCQAs和5-CQA含量最高,HT提取物中的diCQAs和5-CQA含量最低,但1-CQA和3-CQA含量最高。因此,微波是提取藜蒿多酚的适宜方法,高温可导致diCQAs化合物的降解,且4-和5-caffeoyl比1-和3-caffeoyl更容易断裂。因此,微波是提取藜蒿多酚的适宜方法。(3)乙酸乙酯和正丁醇分别是富集藜蒿叶中的黄酮和酚酸类化合物适宜溶剂。但正丁醇相(nBuF)具有最高的DPPH·清除能力(IC50=543.0 mg BHA/g Fr.)、ABTS+·清除能力(IC50=158.2 mg Trolox/g Fr.)和还原能力(IC0.3=401.6 mg BHA/g Fr.),其次为乙酸乙酯(EAF)和氯仿相。采用HPLC-QTOF-MS2技术在藜蒿EAF和nBuF中总共检测到了57种化合物,包括11种有机酸、16种黄酮、22种酚酸、5种氨基酸和3种其他类型化合物,其中40种化合物为首次在藜蒿中鉴定。在藜蒿叶的EAF和nBuF中分别鉴定或初步鉴定22和37种化合物,仅quercetin-3-O-galactoside和quercetin-3-O-glucoside为EAF和nBuF共有的化合物。黄酮类化合物为EAF中的主要化合物,酚酸和有机酸为nBuF中的主要化合物。同时,本文首次对eupatilin等5种化合物的MS2裂解行为进行了描述。综上,藜蒿叶可以作为食品加工、保健品和化妆品领域的一种低成本的潜在天然抗氧化剂资源。(4)以橘色肉型(OFL)和白色肉型(CFL)甘薯叶为研究对象,与传统辅助提取方法比较,研究DHPMAE在植物多酚提取中的潜力。结果显示,DHPMAE提取物具有最高的总酚、总黄酮含量,以及DPPH·和ABTS+·清除能力、螯合能力和还原能力。且DHPM处理不会导致甘薯叶中多酚类化合物的氧化降解,因此,DHPMAE是提取甘薯叶中多酚类化合物的最佳方法,可作为一种新的提取植物中天然活性成分的技术。通过比较OFL和CFL化学组成的差异,总共从OFL和CFL的DHPMAE提取物中初步鉴定22种化合物,其中p-hydroxybenzoic acid、isopropylmalic acid、azelaic acid和fatty acids等10个化合物为首次次在甘薯叶中鉴定。Dihydrokaempferol-glucoside、succinic acid和13-keto-octadeca-9,11-dienoic acid只在OFL中检测到,而Glu-Leu/Ile hexose和Octadecatrienoic acid dipentose只在CFL中检测到。同时,本章首次对13-keto-octadeca-9,11-dienoic acid等3种化合物的二级质谱裂解规律进行了详细描述。(5)甘薯叶的DHPMAE提取物依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取后,其抗氧化成分主要富集在乙酸乙酯相(EAF)。EAF有最高的总酚(569.38 mg GAE/g Fr.)、总黄酮(43.15 mg RT/g Fr.)含量,远高于nBuF中的96.62 mg GAE/g Fr.和23.79 mg RT/g Fr.,同时EAF具有最高的抗氧化能力,其IC50 DPPH·、Ab0.3reducing power和IC50 ABTS+·分别为1306.5、1840.1和702.74 mg Trolox/g Fr.。采用HPLC-QTOF-MS2法从EAF中共鉴定出37个化合物,包括20个酚酸、12个黄酮、3个有机酸、1个核苷酸和1个酯类,其中caffeoyldexopentitol、6’’-(4-carboxy-3-hydroxy-3-methylbutanoyl)hyperin和butyl-dicaffeoylquinate等20种化合物为首次在甘薯叶中鉴定。CQAs衍生物和黄酮类化合物是甘薯叶中含的主要化合物。另外,本论文首次描述了3,7-dimethylquercetin、kaempferide-3-O-sulate和6’’-(4-carboxy-3-hydroxy-3-methylbutanoyl)hyperin的MS2裂解规律。以上结果可以为甘薯叶的生物活性研究提供理论依据,同时也可以为其他植物中生物活性成分的快速鉴定提供技术支持和借鉴。(6)以DPPH·清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性为导向,采用一系列植物化学方法从甘薯叶自由基清除能力最高的组分中分离鉴定出3,4,5-triCQA(4)、3,5-diCQA(6)、7,3’-dimethylquercetin(13)等9个化合物。从α-葡萄糖苷酶抑制活性最好的组分中得到trans-N-(p-coumaroyl)tyramine(1)、trans-N-feruloyltyramine(2)和cis-N-feruloyltyramine(3)等7个化合物。其中化合物1、2、3、8、10、11、13和15为首次在甘薯叶中鉴定的化合物。化合物1、2、3、10为首次在番薯属中鉴定。化合物14、1012、5和7的α-葡萄糖苷酶抑制活性均高于阳性对照Acarbose,是甘薯叶中的主要α-葡萄糖苷酶抑制剂。化合物47、9、10、12和14的自由基清除能力均高于阳性对照Vc,是甘薯叶中主要的抗氧化剂。另外,奎宁酸的咖啡酰化程度越高、黄酮类化合物的甲氧基程度越低,化合物的抗氧化活性越强;Phenethyl cinnamides中苯环的甲氧基化和顺式结构会降低化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。以上结果可以为甘薯叶抗氧化和糖尿病预防活性的研究和在功能性食品中的应用提供理论依据。
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