论文部分内容阅读
单宁是广泛存在于植物中的一大类多酚化合物,是近年来不断研究开发的一种极强的体内活性功能因子。许多研究表明,单宁具有较强的抗氧化能力和较好的药理活性,目前国内外正将其广泛应用于保健品、药品和化妆品等领域。由于单宁结构复杂,人工合成不易,国内外主要从含有单宁的天然植物如五倍子中提取。因为天然资源有限,导致国内外市场单宁价格迅速上涨,因此从其它富含单宁的植物中提取单宁有一定实际应用意义。石榴营养十分丰富,其蛋白质含量高、氨基酸种类齐全、矿物质元素丰富,并含有一定量的有机酸,同时还含有少量的原花青素、花色素及黄酮类物质,对满足人体的需要都是非常重要的,但目前对石榴中单宁的深入研究却鲜有报道。经检测,石榴果实各部位(包括石榴皮、汁、籽)均有含有丰富的单宁类物质(10%~21%),可以作为单宁提取的天然资源加以开发。本课题旨在对不同品种石榴果实的不同部位(皮、汁、籽)中单宁的提取、分离纯化,结构鉴定、抗氧化性及抑菌效果作出研究,希望对石榴的进一步开发利用起到一定的推动作用。本课题主要研究结果如下:1.首先分别测定了3个不同品种新鲜石榴的果皮、果汁、籽粒中总酚、单宁、原花青素、花色素及总黄酮的含量,结果表明陕西临潼酸石榴、大红袍石榴、三白石榴的皮、汁、籽中单宁含量均较高,很有研究意义,因此确定为实验材料。2.对石榴皮中单宁的提取工艺进行了初步探讨,采用水提的方法,通过单因素实验,和正交实验的基础上,分析得出了提取石榴皮单宁的最佳工艺条件:提取温度100℃、提取时间1h、料液比1:20、pH=7、添加0.5%NaHSO3、提取3次。在此最佳工艺组合下石榴皮单宁的平均提取率可达90%。另外,对于石榴籽中单宁的提取采用脱脂后丙酮浸提的方法,而对石榴果汁中单宁的提取只需榨汁后离心除杂即可。3.采用固相萃取的方法,用大孔树脂吸附对3个品种石榴不同部位的单宁粗提物进行了纯化,分别得到9种石榴单宁(pomegranate tannin extracts,简称PTEs)提取物,作为下一步研究的对象。4.采用HPLC及LC/MS等手段对酸石榴皮单宁提取物(Extract of sour pomegranate peel tannin,简称为SPTE)的结构鉴定进行了深入研究,结果表明SPTE中富含石榴苷(m/z=1083)、石榴林(m/z=781)及鞣花酸(m/z=301)、EA-hexoside(m/z 463)及EA-rhamnoside(m/z 447),另外还推测了5种化合物可能的结构及裂解途径:化合物1(m/z=799)经推测可能为石榴林与水的聚合物,也可能为石榴亭A;化合物2(m/z 783),双六羟基联苯二酰基葡萄糖甙;化合物3(m/z 633),鞣料云实素;化合物4(m/z 541),HHDP-葡萄糖-5,6-二羧酸;化合物5(m/z 951),石榴亭B。5.采用化学发光法对9种PTEs的体外抗氧化性能做出评价。结果表明,在4个不同的化学发光体系中PTEs体现了很好的清除O2-·、·OH和H2O2的能力以及对DNA损伤的保护作用。其中,大红袍石榴皮单宁提取物具有最好的清除超氧阴离子的作用,而大红袍品种的石榴籽单宁提取物的效果最差;三白石榴籽单宁提取物对羟基自由基的清除作用最明显;在双氧水体系中,三白石榴皮单宁提取物对化学发光具有最低的半数抑制浓度,因此对双氧水的清除效果最佳;而三白石榴籽单宁提取物对DNA的损伤具有最好的保护作用。6.采用纸片法对9种PTEs的抑菌能力进行了研究:PTEs在0.04 mg/mL浓度下对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑制作用,同时也具有杀灭作用;PTEs在0.2 mg/mL浓度下对酵母菌和黑曲霉具有抑制作用,并没有杀灭作用。