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人白细胞抗原(HLA-G)是一种非经典的HLA-I类基因,与人免疫耐受相关。选择性表达于母胎界面的绒毛膜滋养层细胞,在诱导母体对半同种异体胎儿的妊娠免疫耐受起着重要作用。一些报道还发现黑色素瘤细胞中有HLA-G高水平的mRNA转录及蛋白表达,从而推测HLA-G可能在诱导肿瘤细胞免疫逃逸。相对于经典的HLA-Ia类分子,HLA-G与其他非经典的HLA-Ib类一样在基因和蛋白水平上都表现出有限的多态性,目前已公布的HLA-G等位基因仅有16种。HLA-G另一显著特征就是其mRNA初始转录经选择性剪接产生至少7种同种异型体,分别编码4种膜结合型(HLA-G1-G4或mHLA-G1-G4)及3种可溶性HLA-G(HLA-G5-G7或sHLA-G1-G3)。利用已经构建好的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,进一步构建了重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1,表达出重组蛋白His-sHLA-G1,并对重组蛋白进行了纯化和鉴定。β2微球蛋白(β2m)是主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ类分子的轻链部分,该蛋白的原核表达与纯化是制备MHC-I类分子的首要条件。利用已经构建好的人β2m(hβ2m)的原核表达载体pET23a-hβ2m,在大肠杆菌(E. coli)中获得稳定表达。原核表达的hβ2m大部分在包涵体中,包涵体蛋白经充分洗涤、变性(脲溶解)和复性,并以强阴离子交换柱层析(Q-Sepharose)纯化,获得SDS-PAGE纯的hβ2m ,Western印迹法分析表明,该蛋白具有与抗人天然β2m抗体反应的特性。在最佳的诱导表达条件下,即:37℃,在含lmmol/L的IPTG的LB培养基中重组蛋白His-sHLA-G1和hβ2m分别诱导5 h, 3 h,两蛋白均以包涵体的形式得到了大量的表达。SDS-PAGE电泳显示其分子量分别为36 kD和12 kD,与预期相符。在Western blot免疫印迹分析,重组蛋白与87G单克隆抗体,hβ2m与其腹水多克隆抗体B2.62.2发生特异性反应。重组蛋白His-sHLA-G1包涵体经6 mol/L的脲溶解后用钴离子树脂纯化,获得理想的纯化效果。hβ2m蛋白包涵体经洗涤溶解和复性纯化后也获得较高的纯度,满足辅助重组蛋白His-sHLA-G1复性的要求。重组蛋白His-sHLA-G1在与hβ2m稀释法共复性,超滤浓缩后,在20μg/ml的浓度下,分别以NK92和K562细胞为效应细胞和靶细胞,在5: 1和2.5: 1的效靶比例下,用乳酸脱氢酶法(LDH法)测定NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果表明20μg/ml重组蛋白复合物能显著抑制NK细胞的杀伤活性,加入1.9μg/ml抗体87G能阻断大部分的抑制活性,说明重组蛋白His-sHLA-G1经过共复性已经具有生物学活性,为进一步的工作奠定了基础。