第一部分 GST蛋白变复性的研究 蛋白质变复性的研究具有很重要的意义，我们纯化了GST蛋白并以此为模型，运用多种技术对GST蛋白的变复性进行了研究。 1、GST蛋白亲和层析介质的制备及GST蛋白的表达纯化 以Sepharose4B为原料，在强碱性条件下用1，4-丁二醇二缩水甘油醚活化，再与谷胱甘肽溶液反应，通过条件优化实验，得到最佳GST蛋白亲和层析介质。此法制得的亲和介质具有很高的特异性，纯化效果很好。其亲和吸附能力达到4.2mg／ml，远高于用环氧氯丙烷为活化剂制备的亲和介质，与相应国外商品化介质的性能相近。使用该介质，我们获得了纯度超过90％的GST蛋白。 2、GST蛋白热变性过程的研究 我们以GST蛋白为模型，联用CD，DSC，荧光分析，蛋白质计算机模拟，UV，HPLC，凝胶电泳等多种技术，研究热变性过程中蛋白质结构上的变化行为，结合变性过程中蛋白质活性的变化，探讨了GST蛋白的热变性机理。发现GST蛋白的变性失活温度为51—59℃。随着温度的升高，GST蛋白结构发生了显著的改变，二级结构中β折叠所占的比率明显增高，并且蛋白的疏水可及表面增加，同时GST蛋白的活性二聚体形式被破坏，并形成多聚体，导致GST酶活的丧失。 3、分子印迹聚合物介导GST蛋白复性的研究 分子印迹技术的研究主要针对特定分子的识别、分离与催化。我们将该技术应用于蛋白质变复性研究，发现分子印迹聚合物对变性蛋白的复性有明显的辅助作用。在对变性的GST蛋白进行复性研究中，与空白聚合物、BSA蛋白分子印迹聚合物相比，GST蛋白分子印迹聚合物能够显著提高变性GST蛋白的复性效率。 同时我们还发现GST蛋白分子印迹聚合物在提高GST蛋白的复性效率过程中可以重复使用，从而使其在工业上的应用具有更大的可能性。 第二部分　ZZ蛋白亲和介质的制备和应用 目前在纯化IgG抗体和免疫检测中常用的工具是Protein A亲和介质，Protein A由天然金色葡萄球菌中分离获得，因此价格昂贵，而且Protein A与IgG的结合有一定的限制。ZZ蛋白是一个根据Protein A的B结构域人工合成的一个IgG抗体Fc片段结合蛋白，在免疫检测和纯化IgG方面有着巨大的应用潜力。本文中，在T7启动子的控制下，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达了N端带有6个组氨酸标记物的重组ZZ蛋白，经过一步Ni－琼脂糖亲和层析，获得了较高纯度的重组ZZ蛋白，表达量约为50mg／L。将ZZ蛋白通过1，4－丁二醇二缩水甘油醚偶联到Sepharose 4B上制得ZZ亲和介质，该亲和介质可以用于IgG抗体的特异性亲和纯化，并且在免疫共沉淀实验中表现良好，具有和Protein A亲和介质相近的性能。因为ZZ蛋白易于表达纯化且表达量很高，相对与ProteinA价格低廉，可以预期在不久的将来ZZ蛋白有着广阔的应用空间。