延黄牛肌内脂肪沉积相关基因的研究

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本研究在延黄牛与中国西门塔尔牛肉质性状差异分析的基础上,以延黄牛高肌内脂肪含量和低肌内脂肪含量个体的背最长肌组织为研究对象,利用转录组测序技术,构建转录图谱,筛选差异表达基因,利用qRT-PCR技术对差异表达候选基因进行了验证,并比较了候选基因在延黄牛脂肪前体细胞诱导分化前后转录水平的变化,初步研究了促黄体素对脂肪前体细胞生长和分化的影响,为延黄牛肌内脂肪沉积遗传机理的研究及其在育种工作中的有效应用奠定了基础。主要研究结果如下:  (1)选择12月龄的延黄牛与中国西门塔尔牛(平原类群)各10头,在相同饲养条件下持续育肥12个月,对其牛肉品质进行了比较研究。结果表明:延黄牛系水力、熟肉率、剪切力、粗脂肪含量等指标均极显著优于中国西门塔尔牛(P<0.01)。说明延黄牛的牛肉营养价值、肌肉品质均优于中国西门塔尔牛,更适宜生产高档雪花牛肉。  (2)选取延黄牛高肌内脂肪含量个体和低肌内脂肪含量个体各3头,利用Illumina转录组测序技术对背最长肌中与肌内脂肪沉积相关的差异表达基因进行筛选。结果表明:共有差异表达基因72个,其中12个在高肌内脂肪组上调,60个下调。差异表达基因GO分析结果表明:33个基因参与生长、依赖于RNA的DNA复制、ATP合成的耦合运输等生物学过程,4个基因与线粒体质子转移ATP合成酶复合体、MHC蛋白复合体、质子转移ATP合酶复合体等细胞组成有关,42个基因与底物特异性跨膜转移体活性、质子跨膜转移体活性等分子功能有关。信号通路分析发现:高肌内脂肪组上调基因参与催乳素信号通路(LHCGR)、神经活性配体-受体互作(LHCGR)、叉头框0信号通路(FBXO32)等信号通路,而下调基因参与了TGFβ信号通路(BMP7、MSTN)、NF-kappa B信号通路(TRAF5)、Jak-STAT信号通路(CISH)、PI3K-Akt信号通路(COL1A1)、细胞因子间互作(IL2RB)等信号通路。  (3)将延黄牛高肌内脂肪个体上调基因肾上腺髓质素(ADM)、促黄体激素-绒毛促性腺激素受体(LHCGR)、F盒蛋白32(FBXO32),下调基因粘蛋白4(MUC4)、肌肉生长抑制素(MSTN)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)、α1Ⅰ型胶原(COL1A1)、细胞因子诱导的SH2包含蛋白(CISH)、肌集钙蛋白2(CASQ2)、骨形态发生蛋白7(BMP7)作为与肌内脂肪含量相关的候选功能基因,在高、低肌内脂肪含量群体内利用实时定量PCR进行了体外验证,结果显示:两组间BXO32、AMD、LHCGR、MUC4、MSTN、IGFBP5、COL1A1、CASQ2、BMP7转录水平差异与测序结果一致。  (4)对体外分离的延黄牛脂肪前体细胞进行体外诱导分化,对分化前后BXO32、AMD、LHCGR、MUC4、MSTN、IGFBP5、COL1A1、CASQ2、BMP7的表达进行检测,结果显示:FBXO32、AMD、LHCGR、MUC4、MSTN、IGFBP5、 COL1A1和BMP7在脂肪前体细胞分化前后转录水平发生了显著改变(P<0.05),表明上述基因在脂肪细胞分化过程中发挥作用或者受脂肪细胞分化的调控。  (5)利用促黄体素(LH)处理牛脂肪前体细胞进行体外诱导分化,检测LH对脂肪细胞的影响,结果显示:添加LH可促进牛脂肪前体细胞的增殖,增加诱导后细胞内总脂肪含量,使CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)转录水平极显著上调(P<0.01),对增强脂肪前体细胞的分化能力有明显的促进作用。
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