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背景和目的:胃癌作为消化系统最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率位居恶性肿瘤前列。中国是胃癌的高发国家,全世界有近一半的胃癌患者生活在中国,胃癌已经成为我国发病率和死亡率高居第二位的恶性肿瘤。尽管近年来以外科手术为主、辅以放化疗的综合治疗方式取得极大进展,但是晚期胃癌患者的预后仍不理想。胃癌晚期患者预后不佳的主要原因是发生远处转移。上皮间质转化（Epithelial Mesenchymal Transition,EMT）是上皮细胞通过特定程序向间质表型细胞转化的动态过程,随着EMT研究的深入,发现其与肿瘤的发生发展、侵袭转移、肿瘤干性和耐药性等多种肿瘤功能密切相关。在几乎所有的恶性肿瘤中,恶性进展取决于肿瘤细胞中EMT的激活。因此深入探索胃癌发生发展的相应机制,寻找胃癌早期特异性诊断标志物和治疗新靶点是亟待解决的问题。12-脂氧合酶（Arachidonate 12-Lipoxygenase,ALOX12）是脂氧合酶家族的重要成员之一,能代谢花生四烯酸产生具有生物活性的类花酸产物,在血管生成、炎症反应、动脉粥样硬化、肿瘤等生理病理情况下发挥重要作用。近年来研究发现ALOX12在多种肿瘤中存在表达上调,且与恶性肿瘤的EMT存在一定联系,但ALOX12在胃癌上皮间质转化中的作用及机制尚不明确。鉴于此,本课题将首先研究ALOX12在胃癌临床标本的表达并分析与临床病理资料和生存预后的关系;其次通过转录组测序技术检测ALOX12调控胃癌细胞的差异表达基因,分析其相关的功能作用;第三在细胞和动物水平研究ALOX12对胃癌细胞恶性生物学行为的作用;最后深入探讨ALOX12影响胃癌细胞恶性生物学行为的具体分子机制。本研究旨在研究ALOX12在胃癌中的差异表达及临床意义,明确ALOX12对胃癌细胞生物学作用和调控机制,以期为胃癌的早期监测和治疗提供新的思路和视角。方法:（1）利用GEO数据库分析胃癌患者ALOX12基因在胃癌和癌旁组织中的表达情况,并分析ALOX12表达与胃癌预后的关系。通过RT-PCR、Western blot检测正常胃上皮和胃癌细胞株中ALOX12的表达水平,免疫组化技术检测ALOX12在胃癌和癌旁组织中的表达情况,分析ALOX12与患者临床病理因素以及与预后的关系;（2）通过慢病毒构建ALOX12的过表达稳转株,并用RT-PCR、Western blot进行验证。对过表达ALOX12和阴性对照组细胞进行转录组测序,分析筛选差异基因,并利用生物信息学进行GO分析、KEGG富集分析,构建PPI网络;（3）在细胞体外实验,通过CCK8、平板克隆形成实验、Transwell迁移侵袭小室检测ALOX12对胃癌细胞增殖、迁移侵袭能力的影响;采用裸鼠皮下成瘤、尾静脉转移建模检测ALOX12对裸鼠体内胃癌细胞增殖、迁移侵袭等生物学行为的影响;（4）通过RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术等方式从m RNA和蛋白水平检测过表达ALOX12后EMT标志蛋白的表达情况;通过Western blot检测过表达ALOX12后对Wnt-β-catenin通路和EMT相关蛋白的影响。结果:（1）GEO数据库分析发现两套胃癌组织数据集中,ALOX12在胃癌组织表达较癌旁组织中明显升高,且与胃癌的不良预后呈正相关;RT-PCR和WB结果显示,胃癌细胞系BGC823、MGC803、AGS、HGC27细胞中的ALOX12在m RNA和蛋白表达水平上高于正常胃粘膜上皮细胞GES-1,IHC检测胃癌组织发现ALOX12在56.7%的胃癌组织中呈高表达,而在对应的癌旁组织中35.6%呈高表达,ALOX12在胃癌和对应癌旁组织的表达差异具有统计学意义（P<0.01）,且ALOX12的高表达与胃癌患者的淋巴结转移情况（P=0.043）、TNM分期（I+II/III+IV）（P=0.019）、脉管浸润（P=0.009）密切相关,但同患者的年龄、性别及肿瘤部位等因素无明显相关性。ALOX12高表达的胃癌患者生存时间较短,ALOX12是胃癌患者预后较差的独立危险因素。（2）构建ALOX12过表达和阴性对照组的稳转BGC823、MGC803细胞株并经RT-PCR和WB实验鉴定有效;通过对过表达ALOX12及阴性对照组MGC803细胞进行转录组测序,筛选出258个差异表达基因,其中上调DEGs有165个基因,下调DEGs有93个;GO分析显示,较多的差异基因参与细胞增殖、迁移的正调控和细胞间黏附以及分子信号转导等;KEGG分析表明,基因显著富集在细胞黏附连接、细胞外基质组分和肿瘤相关通路上;PPI分析发现关键节点的前十个基因分别是MMP9、GNG7、ITGB2、ITGAX、BDNF、NT5E、CASP1、LOX、SAA1、CSF1,多参与于EMT和肿瘤相关的生物进程。（3）CCK8实验表明过表达ALOX12的胃癌细胞增殖速度较快;平板克隆实验显示过表达ALOX12的胃癌细胞的克隆形成能力明显增强;Transwell迁移和侵袭实验证明ALOX12过表达促进胃癌细胞的迁移和侵袭能力;裸鼠皮下成瘤实验结果发现,和空白对照组相比,过表达ALOX12组细胞的增殖速度增快（P<0.05）;裸鼠尾静脉注射胃癌细胞肺转移模型结果显示,过表达ALOX12能促进胃癌细胞体内转移。（4）ALOX12促进胃癌细胞EMT的形态学改变;RT-PCR、WB和IF结果显示,过表达ALOX12能显著下调上皮表型标志物E-cadherin,增加间质表型标志物N-cadherin和Snail的表达,促进胃癌细胞EMT发生;ALOX12通过激活Wnt-β-catenin信号通路上调TCF-1、c-MYC、Cyclin D1等下游通路的效应分子的表达来促进胃癌的EMT,进而促进胃癌的进展。结论:（1）ALOX12在胃癌组织中表达较癌旁组织呈高表达,ALOX12的高表达患者总体生存期较短,预后较差,ALOX12是胃癌不良预后的独立危险因素;（2）ALOX12的表达与胃癌细胞中的细胞黏附、细胞外基质和上皮表型调控等关系最为密切;（3）过表达ALOX12能在体内外实验促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;（4）过表达ALOX12能通过激活Wnt-β-catenin通路促进胃癌的上皮间质转化,进而促进胃癌的进展。