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目的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF),是重要的血管生成因子之一,目前在许多肿瘤组织中均发现VEGF有较高水平的表达,靶向VEGF的siRNA可明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。本研究应用慢病毒载体介导的siRNA抑制胃癌细胞VEGF基因的表达,探讨慢病毒介导的RNA干扰技术治疗胃癌的可行性和特异性,以及与紫杉醇联合应用的疗效。方法培养的人胃癌细胞SGC7901分为三组：空白对照组、慢病毒VEGF-siRNA-Lv干扰组及慢病毒NC-Lv阴性对照组,后两组分别感染重组慢病毒载体(VEGF-siRNA-Lv)及慢病毒载体阴性对照(NC-Lv),建立稳定表达靶向VEGF siRNA的细胞系及阴性对照细胞系。病毒感染96h后,分别提取各组细胞总RNA及蛋白,RT-PCR法检测各组细胞bcl-2及p21mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞SIRT1及p53蛋白的表达水平。4周龄的裸鼠随机分为4组：空白对照组、VEGF-siRNA-Lv组、VEGF-siRNA-Lv联合紫杉醇治疗组及NC-Lv阴性对照组,分别于右腋皮下注射2×106个SGC7901细胞、VEGF-siRNA-Lv感染细胞及NC-Lv感染细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。VEGF-siRNA-Lv联合紫杉醇组于出瘤后注射紫杉醇(按30mg/Kg体重给药,每周一次)治疗。每3d测量一次肿瘤体积,制作肿瘤生长曲线。出瘤2周后处死裸鼠,分离出肿瘤组织,称重并常规HE染色,观察肿瘤的组织学变化,RT-PCR检测VEGF的表达,Western Blot检测SIRT1、P53、P21、BCL-2、VEGF、Survivin蛋白的表达,免疫组化检测肿瘤组织中CD34的表达。结果病毒感染96h后于荧光显微镜下观察,感染慢病毒载体的两组细胞发出较强荧光,细胞内GFP表达高达90%以上,而空白对照组细胞未见荧光。与空白对照组及阴性对照组相比,RT-PCR显示VEGF-siRNA-Lv组细胞VEGF、bcl-2的mRNA表达明显下调(p<0.05),p21mRNA表达则明显上调(p<0.05),Western blot显示VEGF-siRNA-Lv组细胞SIRT1蛋白表达下调(p<0.05),p53蛋白表达则明显上调。体内试验表明裸鼠胃癌的成瘤率为100%,空白对照组和阴性对照组裸鼠瘤体生长较快,而VEGF-siRNA-Lv组及VEGF-siRNA-Lv联合紫杉醇治疗组裸鼠瘤体的生长受到明显抑制。与空白对照组及阴性对照组相比,VEGF-siRNA-Lv组VEGF mRNA表达则明显下调(p<0.05),Western blot显示VEGF-siRNA-Lv组SIRT1、 BCL-2、VEGF、Survivin蛋白表达下调(p<0.05),而P53和P21蛋白表达则明显上调(p<0.05)。VEGF-siRNA-Lv组及VEGF-siRNA-Lv联合紫杉醇治疗组移植瘤组织中CD34表达明显降低。结论慢病毒介导的RNAi不仅能成功抑制胃癌细胞VEGF基因和蛋白的表达,通过下调SIRT1蛋白的表达,导致p53蛋白表达上调,并调控其下游p21、bcl-2基因的转录,从而诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。而且可明显抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长,与紫杉醇联合应用可以提高疗效。