【摘 要】
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怀地黄(Rehmannia glutinosa)为玄参科多年生草本植物,是我国传统中药材,应用广泛.本实验以怀地黄叶片为外植体,以附加20g·L蔗糖和8g·L琼脂的大量元素减半的MS培养基为基本
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怀地黄(Rehmannia glutinosa)为玄参科多年生草本植物,是我国传统中药材,应用广泛.本实验以怀地黄叶片为外植体,以附加20g·L<-1>蔗糖和8g·L<-1>琼脂的大量元素减半的MS培养基为基本培养基,研究了怀地黄离体植株再生和发根农杆菌介导的毛状根诱导和培养技术.结果表明:叶片在附加BA2.0 mg·L<-1>和NAA0.1 mg·L<-1>基本培养基上诱导不定芽,不定芽在附加有BA0.6 mg·L<-1>和NAA0.2 mg·L<-1>培养基上形成丛生芽,切取2~3cm的不定芽转到含IBA2.0 mg·L<-1>,BA0.5 mg·L<-1>,蔗糖浓度为40 g·L<-1>培养基上诱导生根,移栽,89.2﹪的植株可以存活,并且生长旺盛.以叶片诱导的不定芽转接到IBA2.0 mg·L<-1>+BA 2.0 mg·L<-1>+NAA0.2 mg·L<-1>,蔗糖浓度为40 g·L<-1>培养基上可以诱导微型块茎,诱导率可达到每个外植体平均块茎数量为6.3个,微型块茎在基本培养基上可以发育成完整的植株,移栽后成活率为100﹪.用MS+AS40 μ mol·L<-1>培养液重悬的发根农杆菌R1601感染在BA2.0 mg·L<-1>+NAA0.1 mg·L<-1>+AS40 μ mol·L<-1>培养基上预培养4d的叶片15~25min后,将叶片转到MS+NAA0.1 mg·L<-1>+AS40 μ mol·L<-1>培养基上共培养2~3d,然后将叶片转到含有Cef500 mg·L<-1>的MS培养基上反复除菌,直到无菌为止,再转到MS+Kan40 mg·L<-1>选择培养基上继续培养,10d后长出毛状根.取毛状根进行纸电泳分析检测到毛状根中农杆碱和甘露碱的存在.并抽毛状根DNA,设计合成扩增rolB的引物做PCR,扩增到一条862bp的特异性带,证明毛状根基因rolB转移到毛状根基因组中.
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