大麦(Hordeum vulgare L.)是世界重要的粮食作物,在全球范围内广泛种植,是啤酒和饲料的主要原料。经过近十年的发展,大麦基因工程研究得到了广泛的应用,在大麦品质改良、抗病研究和抗胁迫等领域获得了很多具有积极意义的成果。近年来,全球气候变化无常,自然灾害频繁发生,其中冻害已经对大麦的生产造成了严重的影响,随着转基因技术的发展,将优良的外源抗冻基因转化到大麦中去,可显著提高大麦的抗冻性。本研究以不同大麦品种为材料建立了大麦幼胚再生体系,构建了高效的抗冻基因KN2表达载体,并且对其进行了遗传转化研究。得到的研究结果如下：(1)以4个大麦品种(美里黄金,Golden promise,华大麦4号,华大麦7号)的幼胚为试验材料,建立了大麦再生体系并对比了这四个品种之间的差异。研究结果表明：这四个品种的离体培养效果都很好,均可作为遗传转化的受体,诱导培养基中添加0.2mg/L的ABA对胚性愈伤组织的形成和再分化有促进作用。(2)以植物表达载体pCAMBIA33011为基础,通过在引物的两端分别设计酶切位点KpnI和BamHI,采用T-simple载体与扩增的目的基因KN2连接。分别酶切带有目的基因的T载体和高效表达载体pCAMBIA33011,胶回收酶切产物并连接,得到含抗冻基因KN2的高效表达载体pCAMBIA33011K,并将其导入农杆菌AGL1菌株,为农杆菌介导的抗冻基因KN2遗传转化研究夯实了基础。(3)农杆菌介导大麦的遗传转化研究：试验中以美里黄金、Golden promise、华大麦6号和华大麦7号这四个基因型的幼胚作为转化受体,采用农杆菌介导法对抗冻基因KN2进行了遗传转化研究。最后得到77株抗性大麦植株,初步分子检测结果显示,其中的15株为阳性植株。