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细胞色素 P450(CYP)是一类具有氧化代谢活性的蛋白超家族,它广泛分布于自然界中各种生物体内,动物、植物及大量微生物等生物体内都发现CYP的大量存在。CYP在生物体的有机合成过程中有着非常重要的作用,同时也参与生物体对异源物质代谢降解的过程。目前蛋白体外表达技术及植物的转基因技术在研究CYP代谢有机污染物的能力方面有着十分广泛的应用。 本论文利用转基因技术,在大肠杆菌内大量表达家蝇细胞色素P4506A1(CYP6A1)蛋白,研究了 CYP6A1蛋白对艾氏剂的代谢能力及 CPR蛋白在CYP6A1蛋白代谢过程中的作用。构建了人细胞色素P4501A2(cyp1A2)基因的双元表达载体,通过根瘤农杆菌介导的方法将其导入水稻基因组,为后期研究 CYP1A2抗除草剂的功能打下基础。同时以转大鼠细胞色素P4501A1(cyp1a1)基因烟草为媒介,研究了CYP1A1对苯并芘的代谢能力。主要结果如下: 以大肠杆菌为宿主表达家蝇细胞色素P4506A1酶,在cyp6a1基因后面加入人细胞色素P450还原酶CPR基因,验证了CPR酶对CYP6A1酶催化功能的影响,以及CYP6A1酶、重组大肠杆菌对艾氏剂的代谢能力。结果表明:CYP6A1蛋白对艾氏剂有环氧化作用,CPR蛋白在CYP6A1对艾氏剂催化的过程中起着非常关键的作用。将5μmol/L艾氏剂加入重组大肠杆菌菌液培养液中经8 h后可检测到163.36nmol/L艾氏剂环氧化产物-狄氏剂,说明cyp6a1-cpr宿主菌对艾氏剂具有代谢能力,可应用于艾氏剂污染的土壤的生物降解。 利用农杆菌介导的转基因技术将含有 cyp1a2基因的双元表达载体转入水稻日本晴,PCR鉴定T0代阳性植株,现培育T1代,为后期研究CYP1A2抗除草剂的功能打下基础。 在含有50μM苯并芘的水质培养基上,将转cyp1a1基因烟草植株、野生型植株以及转入空载体的植株培养5天后,通过液相色谱和液-质联用技术分析烟草根、茎、叶以及培养基残留中的苯并芘及其代谢产物含量,表明了转cyp1a1基因烟草对苯并芘有一定的耐受性和代谢能力。