论文部分内容阅读
目的:建立耐苯妥因钠及苯巴比妥钠杏仁核点燃大鼠耐药癫痫模型,观察耐药性癫痫大鼠海马组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1、NR2B亚单位表达的变化,探讨耐药癫痫的可能机制。 方法:选择100只健康的雄性Wistar大鼠,通过杏仁核慢点燃刺激,建立癫痫模型后,分别给予苯妥因钠及苯巴比妥钠腹腔注射各三次,1小时后测量后放电阈值(Afterdischarge threshold,ADT),ADT平均值不增加或增高小于20%为耐药癫痫组,ADT增高20%以上纳入药物敏感组,另选取8只正常大鼠为正常对照组。三组模型建立成功后立即处死大鼠,取海马组织,用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印记方法检测NMDAR1、NMDAR2B的表达。 结果:1.模型制作情况:100只健康雄性Wistar大鼠,选取8只为正常对照,剩余大鼠建立癫痫点燃模型。完成点燃72只,成功点燃45只,发作级别均为5级,点燃率62.5%。45只癫痫大鼠经过苯妥因钠及苯巴比妥钠两种一线抗癫痫药物筛选,筛选出耐药性癫痫大鼠8只,耐药率17.7%,成功建立了耐苯妥因钠及苯巴比妥钠的杏仁核点燃癫痫大鼠模型。 2.实时荧光定量PCR:耐药癫痫组海马NR1、NR2B mRNA的相对表达量均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。药物敏感组 NR1、NR2B mRNA的相对表达量比正常大鼠海马稍高,未见显著差异(P>0.05)。 3.蛋白免疫印记:耐药癫痫组海马NR1、NR2B的蛋白相对表达量均高于对照组和药物敏感组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。药物敏感组NR1、NR2B的蛋白相对表达量比正常大鼠海马稍高,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:1.通过杏仁核电刺激慢点燃,并以苯妥英钠和苯巴比妥钠药物筛选后可成功建立理想的耐药癫痫大鼠模型; 2.NR1、NR2B在耐药癫痫组中明显升高,提示其可能参与了耐药癫痫发生机制; 3.NR1、NR2B在药物有效组中升高不明显,提示其可能和药物的作用位点有关。