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目的:探讨脆弱类杆菌的分离与培养及其LPS的提取方法。
方法:收集临床标本,培养、分离、纯化并通过生化试验鉴定脆弱类杆菌;复苏脆弱类杆菌标准菌株。将两种菌株分别接种至厌氧菌液体培养基,同一条件下分别增菌培养,离心收集无明显杂菌生长的增菌培养液洗去杂质。冷冻干燥后称取相同质量的冻干菌粉,分别用改良酚水法和沸水酶解法提取LPS,纯化去除杂质后冷冻干燥称量,并用鲎试剂显色基质终点显色法分别测定内毒素的效价浓度,用紫外光分光光度仪测定核酸含量,考马斯亮蓝G-250染色法检测蛋白含量。
结果:
1)50.Omg脆弱类杆菌干菌粉沸水酶解法提取的LPS质量分别为:标准株0.48±0.10g,临床株:0.48±0.08g;相同质量的脆弱类杆菌干菌粉改良酚水法提取的LPS质量分别为:标准株2.27±0.08g,临床株:2.28±0.13g。标准株组和临床株组间比较,均无明显统计学差异;沸水酶解法组和改良酚水法组比较,前者的产量低,有统计学显著性差异。
2)50.Omg脆弱类杆菌干菌粉沸水酶解法提取的LPS效价质量比为:标准株:O.54±0.02 EU/ng,临床株:O.54±0.03EU/ng;相同质量的脆弱类杆菌干菌粉改良酚水法提取的LPS效价质量比为:标准株:0.59±0.10 EU/ng,临床株:O.57±0.03EU/ng。标准株组和临床株组间比较,沸水酶解法组和改良酚水法组比较,均无明显统计学差异。
3)两种方法提取两种菌株的LPS经紫外光分光光度法和考马斯亮蓝染色法均未检测到核酸或蛋白质杂质。
结论:改良酚水法提取脆弱类杆菌LPS的产量较沸水酶解法的产量高;两种方法提取的LPS纯度均较高,经紫外光分光光度法和考马斯亮蓝染色法均未检测到含有核酸或蛋白质杂质。