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研究背景与目的:对于伴有恶性胸腹腔积液的晚期肿瘤患者,临床可以简单、微创、反复地获得这些积液,但恶性胸腹腔积液中肿瘤细胞HER2、EGFR、c-MET和VEGFR2的蛋白表达水平未被研究,可以利用什么方法来检测这些蛋白;积液中肿瘤细胞上蛋白的表达水平与原发灶蛋白的表达相关性也不明确;这些蛋白的表达水平又是否可以为临床恶性胸腹腔积液的靶向治疗提供参考。基于以上思考,我们通过流式细胞技术、免疫细胞(组)化学技术来检测恶性胸腹腔积液中肿瘤细胞及原发灶HER2、EGFR、c-MET和VEGFR2的蛋白表达水平,并利用原代细胞培养药敏法探讨蛋白表达水平与恶性腹腔积液中肿瘤细胞靶向药物敏感性的相关性。方法:收集64例南京大学医学院附属鼓楼医院2013年9月至2014年10月确诊为恶性肿瘤患者的恶性积液。将恶性胸腹腔积液制作成细胞石蜡块,并通过免疫细胞化学技术来检测恶性积液石蜡块中肿瘤细胞HER2、EGFR、c-MET和VEGFR2的蛋白表达水平,其中有25例积液利用流式细胞技术通过标记FITC-conjugated CD45,PE-conjugated CD326/EpCAM,APC-conjugated HER2、EGFR、c-MET、VEGFR2抗体来检测这四种蛋白的表达情况。我们同时比较了肿瘤原发灶和恶性积液中四种蛋白表达水平的差异。并通过CCK8体外药敏实验来验证积液中肿瘤细胞蛋白表达水平与Trastuzumab, Cetuximab, Crizotinib和Regorafenib靶向药物敏感性的关系。结果:恶性胸腹腔积液细胞石蜡块的免疫细胞化学检测中,HER2蛋白的阳性表达率为9/64(14.1%),其中4例为3+,5例为2+。EGFR蛋白的阳性表达率为10/64(15.6%),其中3例为3+,7例为2+oc-MET蛋白的阳性表达率为14/64(21.9%),其中4例为3+,5例为2+。VEGFR2蛋白的阳性表达率为4/64(6.25%),其中2例为3+,2例为2+。原发肿瘤灶和恶性胸腹腔积液中HER2和EGFR蛋白表达的一致性分别达94.4%(P=0.002)和89.5%(P=0.016)。高表达HER2、EGFR、c-MET和VEGFR2蛋白的原代肿瘤细胞对Trastuzumab(P=0.026),Cetuximab(P<0.05), Crizotinib(P=0.007)和Regorafenib (P=0.133)靶向药物都存在敏感性,其IC50分别是127μg/ml,89.87μg/ml,5.20μg/ml,41.75μg/ml。结论:1.恶性胸腹腔积液中的肿瘤细胞可以成为我们实时检测的工具;2.ICC可以联合FCM来检测恶性胸腹腔积液中肿瘤细胞上蛋白的表达;3. HER2, EGFR蛋白表达在转移灶与原发灶有较好的一致性,但存在异质性,若原发灶蛋白表达阴性,应进一步检测转移灶;4.恶性胸腹腔积液中肿瘤细胞上蛋白表达水平能为临床选药提供参考价值。