肝细胞癌(HCC)是一种严重危害人类健康的恶性肿瘤，而丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染是导致HCC发生的主要危险因素之一。核心蛋白(core protein)是HCV编码的一种非常重要的病毒结构蛋白，但它可以与许多细胞内蛋白质发生相互作用，在HCV致癌过程中具有重要意义。本研究的目的就是探讨核心蛋白不同区段的致癌作用及其致癌机理，得到核心蛋白致癌作用的整体概貌，以期为研制安全有效的HCV疫苗提供理论依据并为HCC防治提供新靶点。方法：(1) 利用质粒pEGFP-C1和pcDNA3． 1(+)分别构建了两组表达核心蛋白全长和不同片段的重组质粒(HCV-C1-191aa、1-59aa、50-140aa、130-191aa和1-140aa)；(2) 用pEGFP-C1系列重组质粒瞬时转染人L02和HEK293T细胞，通过激光共聚焦显微镜对蛋白的定位进行分析；(3) 用pcDNA3． 1(+)系列重组质粒稳定转染人L02细胞，通过观察细胞超微结构的改变、细胞锚定依赖性生长特性的改变和细胞在裸鼠体内的成瘤情况，检测了核心蛋白不同区段的致癌性；(4) 利用抑制性消减杂交方法，筛检了稳定表达全长核心蛋白的L02细胞与正常L02细胞之间差异表达的基因；(5) 利用RACE技术对新发现的差异表达的MLF1基因变体进行了全长克隆。结果：(1) 共聚焦显微镜观察结果表明，不同长度的核心蛋白在L02和HEK293T细胞中的定位是相同的。全长核心蛋白(1-191aa)和130-191aa区段完全定位于细胞质中，1-59aa区段完全定位在细胞核内，其它区段在细胞质和细胞核中均有存在。(2) 透射电镜观察发现表达HCV全长核心蛋白的L02细胞超微结构发生明显改变，可见严重的核畸形，核质比增加及线粒体肿胀。表达核心蛋白50-140aa区段和130-191aa区段的细胞可见较轻微的超微结构改变，而表达1-59aa和1-140aa区段细胞的超微结构未见明显改变。(3) 软琼脂集落形成实验中观察到表达全长核心蛋白的L02细胞集落形成能力最强，表达1-59aa片段的L02细胞集落形成能力最弱。(4) 裸鼠移植瘤实验结果表明除了核心蛋白1-59aa片段外，其余中文摘要片段均可以使L02细胞在裸鼠体内成瘤，且成瘤组之间没有显著性差异。(5)通过抑制消减杂交实验并经过生物信息学分析，获得了47个己知基因序列和8个未知功能基因序列。(6)通过对MLFI基因变体全长基因序列进行克隆，发现了3个不同的MLFI基因的变体。 结论:通过研究发现HCV核心蛋白前段(1一59aa)几乎没有致癌性，而中后段(50一19laa)有明显的致癌性。由于核心蛋白前段也具有较强的抗原性，常是疫苗免疫原研究的重要靶点。此项研究结果为研究无致癌性的安全疫苗提供了理论依据。通过消减杂交实验发现一系列差异表达基因，这些基因大致可以归为六类，包括与细胞迁移、细胞增殖、物质转运、信号转导、细胞代谢和抗氧化反应有关的基因，表明核心蛋白的致癌作用与这六方面有密切关系。