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研究目的既往研究表明血浆miRNA-29a与肥厚性心肌病患者的心肌纤维化和心肌肥厚程度相关,而血浆miRNA-29a与高血压左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的关系尚未见报道,因而本研究的目的是探讨血浆miRNA-29a与高血压患者LVH的关系,并从动物水平进一步验证miRNA-29a对高血压LVH的影响。研究方法1.miRNA-29a与高血压左室肥厚的关系研究连续入选2016年12月至2017年11月在我院心血管内科门诊就诊的高血压患者168例,收集入选者的一般临床资料,并行超声心动图检查测定左心室肥厚相关参数,包括室间隔厚度(interventricular septal thickness,IVSd)、左心室后壁舒张期厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPWTd)、左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左心室舒张末期容积(left ventricular end diastolic volume,LVEDV)、左心室收缩末期容积(left ventricular end systolic volume,LVESV)、左心房前后径(left atrium,LA)、右心房内径(right atrium,RA)、右心室内径(rightventricular,RV)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS),并计算左心室质量(left ventricular mass,LVM)、左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI),根据LVMI将所有高血压患者分为高血压伴LVH组(简称为LVH组,n=41)和高血压非LVH组(简称为NLVH组,n=127)。所有研究对象留取血样,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)法测定入选者血浆中miRNA-29a的表达。采用pearson相关分析分析miRNA-29a与LVH相关超声参数的关系。进一步采用多元线性回归,排除高血压传统危险因素[性别、年龄、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、体重指数(body mass index,BMI)、高血压病程、降压药物等]影响后,分析miRNA-29a 表达与 IVSd、LVPWTd、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LA、RA、RV、LVEF、LVFS、LVMI 的关系。2.实验性高血压LVH小鼠心肌miRNA-29a表达1)慢性高血压继发LVH模型小鼠心肌miRNA-29a表达:慢性高血压继发LVH模型组(Ang Ⅱ组)(n=8):应用8周龄野生型C57BL/6小鼠(雄性),皮下植入微型渗透泵,泵入 l00ul血管紧张素 Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)溶液,以 1.4ug/(kg·min)的速度连续灌注14天;对照组(n=7)应用8周龄野生型C57BL/6小鼠(雄性)皮下植入微型渗透泵,泵入100ul 0.9%的生理盐水连续灌注14天。观察两组血压,并行超声心动图检查心脏结构变化,14天后处死小鼠,分离左心室组织,提取RNA,检测胚胎基因心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)及 miRNA-29a 的表达。2)急性高血压继发LVH模型小鼠心肌miRNA-29a表达:急性高血压继发LVH模型组(TAC组)(n=10):应用8周龄野生型C57BL/6小鼠(雄性),行主动脉缩窄术(transverse aortic constriction,TAC),部分结扎主动脉弓,造成主动脉狭窄;假手术组(SHAM组)(n=10),游离出主动脉弓后不做结扎。行超声心动图检查心脏结构变化,14天后处死小鼠,分离左心室提取RNA,检测ANP、BNP及miRNA-29a表达。研究结果1.高血压患者血浆miRNA-29a的表达高血压LVH组患者血浆miRNA-29a表达水平明显高于高血压NLVH组(0.52±0.10 vs 0.37±0.07,P<0.01)。pearson相关分析显示,miRNA-29a 与高血压患者LVMI(R=0.745,P<0.01)、IVSd(R=0.459,P<0.01)、LVPWTd(R=0.398 P<0.01)、LVEDD(R=0.345,P<0.01)、LVEDV(R=0.302,P<0.01)、LVESV(R=0.345,P<0.01)相关。进一步多元线性回归分析,排除了包括性别、年龄、SBP、DBP、BMI、高血压病程、降压药物等在内的传统危险因素的影响,结果显示miRNA-29a仍然与LVMI(β=0.806,P<0.01)、IVSd(β=0.535,P<0.01)、LVPWTd(β=0.085,P<0.01)、LVEDD(β=0.403,P<0.01)、LVESD(β=0.066,P<0.01)、LVEDV(β=0.374,P<0.01)、LVESV(β=0293,P<0.01)相关。2.实验性高血压继发LVH 心肌miRNA-29a表达1)慢性高血压LVH模型小鼠心肌miRNA-29a表达:与对照组相比,AngⅡ组小鼠血压在3天后开始升高,14天后SBP(108.8±7.4vs 94.7±8.1,P<0.05)和DBP(84.8±3.4vs64±2,P<0.01)明显高于对照组,14天后小鼠心脏超声检查结果,IVSd(1.73±0.17 vs 0.62±0.03,P<0.01)以及 LVPWTd(0.78±0.06 vs 0.71±0.01,P<0.01)左心室体重比值(left ventricular mass versus body weight,LVM/BW)(3.41±0.05 vs 2.83±0.30,P<0.05)都有显著增加。解剖小鼠后,发现AngⅡ组心脏体积明显较对照组小鼠增大;心重/体重比值(heart weight versus body weight,HW/BW)较对照组增大(3.98±0.16 vs 3.19±0.14,P<0.05)。RT-PCR检测心室胚胎基因 ANP(6.98±5.25 vs 1.06±0.06,P<0.01)和BNP(5.41±1.28 vs 0.9±0.06,P<0.01)表达,发现Ang Ⅱ组较对照组均显著增高;心室组织miRNA-29a表达结果显示:AngⅡ组较对照组显著增加(1.16±0.19vs0.81±0.13,P<0.01);2)急性高血压LVH模型小鼠心肌miRNA-29a的表达:急性高血压继发LVH小鼠手术14天后,超声心动图检查显示:TAC组较SHAM组左室质量指数,IVSd(1.04±0.21 vs 0.66±0.02,P<0.05)、LVPWd(1.74±0.27 vs 0.76±0.11,P<0.01)、LVM/BW(4.29±1.11 vs 3.2±0.38,P<0.05)都显著增加。RT-PCR检测心室胚胎基因ANP(1.36±0.12 vs 0.82±0.34,P<0.01)和 BNP(2.63±0.94 vs 0.74±0.24,P<0.01)表达TAC组较SHAM组均显著增高;心肌细胞凋亡明显较对照组升高。心室组织miRNA-29a表达结果显示:TAC组较SHAM组表达明显升高(2.22±0.21 vs 0.89±0.47,P<0.01)。结论1.在高血压患者中,血浆miRNA-29a表达LVH患者明显高于NLVH患者,且血浆miRNA-29a表达水平与高血压LVH相关。2.实验性高血压LVH动物模型研究显示在急、慢性高血压LVH小鼠心肌组织miRNA-29a表达明显增加,并伴有心肌细胞凋亡增加,表明miRNA-29a可能通过心肌细胞凋亡参与高血压LVH调控。