血吸虫病是一种分布广、危害严重的人畜共患寄生虫病。血吸虫虫卵是血吸虫致病和血吸虫病传播的主要因素。与血吸虫虫卵形成、发育成熟、致病等相关的抗原分子成为人们探讨血吸虫病免疫预防的热点。本研究以此入手，开展了组织蛋白酶L和卵壳蛋白两个与血吸虫产卵相关的基因的分离、鉴定和保护功能的研究。 雌性血吸虫中的组织蛋白酶L基因的转录产物是雄性血吸虫的五倍。血吸虫的组织蛋白酶L并不位于肠道内或肠上皮细胞，而是位于雌虫生殖系统和雄虫的抱雌沟的表皮下层区域。这些都说明组织蛋白酶L可能与血吸虫的生殖产卵有关。根据已发表的日本血吸虫Cathepsin L基因序列，设计一对寡核苷酸引物，采用RT-PCR的方法特异扩增出编码Cathepsin L的基因，插入到pBluescript Ⅱ SK(+)克隆载体进行扩增、测序，再克隆到pET-28a（+）表达载体，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经IPTG诱导在E.coli中表达，SDS-PAGE及免疫印迹对重组蛋白的抗原性进行分析。将6-7周龄昆明系小鼠分为两组，一组接种纯化的SjCL在大肠杆菌中的重组表达产物，另一组为对照组注射佐剂。首免按每只小鼠50ug重组抗原结合佐剂，腿部肌肉注射，2周、4周、6周用同量抗原进行二免，三免，四免。8周后，每只小鼠攻击40条尾蚴，42天后剖杀，冲虫，计数成虫数、肝组织虫卵数和粪卵数。Cathepsin L基因体外扩增产物大小与预期的相符，695bp；构建成功pET-28a(+)-SjCL重组质粒；SDS-PAGE及免疫印迹显示重组蛋白分子量约31kD，重组蛋白具有良好的免疫原性。用重组蛋白免疫小鼠，免疫组与对照组相比，可产生较好的免疫效果，减虫率达36.04％（p＜0.05），肝脏组织减卵率为34％（p＜0.05），粪卵减卵率为49％（p＜0.05）。本研究成功的重组表达日本血吸虫Cathspsin L基因，并分离纯化，首次用Cathepsin L基因重组蛋白进行动物免疫保护实验，实验结果说明Cathepsin L基因重组蛋白作为疫苗很有发展潜力。 卵壳蛋白是促使雌虫成熟和产卵所必需的，在雌雄虫相互作用上具有潜在作用。本研究通过体外扩增和克隆了编码日本血吸虫中国大陆株基因卵壳蛋白SjEGP，实验首先设计合成了特异引物，用Trizol试剂盒提取日 本血吸虫成虫RNA。应用RT尸CR技术扩增SjEGP的编码基因，通过限制 性酶切位点 BamH和 Hindlll将此编码基因片段亚克隆到质粒 pBluescript 和真核表达质粒 pCDNA；中，经酶切和 PCR鉴定表明 pCD－SjEGP含有 SjEGP目的基因片段。这说明扩增片段与预期基因片段长度符合，成功地．构建了真核表达载体，为 SjEGP DNA疫苗的研究打下了基础。为分离，鉴 定与产卵相关的基因，了解卵的产生，发育和成熟的分子机制，发展新的 抗血吸虫病疫苗提供了基础。