猪A病减毒活疫苗冻干工艺过程优化

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本文研究的猪A病,是一种由A病病毒引起的传染性疾病。该病毒广泛存在于养猪行业中,其传播会给业主带来巨大的经济损失。市面上的A病疫苗在-15℃下只能保存一年,而且对于兽用疫苗来说冷链运输的成本比较高。为了克服这些缺点,本文以猪A病抗原为研究对象,以冻干后抗原滴度损失和产品的含水量为指标,通过一系列对比实验优化了冻干工艺中的关键参数。此外还通过DoE(Design of Experiment)的方法进行新型冻干保护剂的探索,并通过剂型优化,研究了节约成本的可能性。实验结果表明最优的冻干工艺条件为:75μm深层滤器收获抗原、25℃下2个小时或2-8℃下48小时解冻抗原、冻干时保护剂的体积浓度为25%、生理盐水为抗原稀释溶剂、抗原与保护剂在室温下混合15-30分钟后进行冻干、复水溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS)。用该工艺条件制备的冻干产品,3批之间重复性很好,冻干滴度损失在0.30 lgTCID50/mL之内,且冻干产品在2-8℃保存12个月后,没有检测到抗原滴度损失。在新型保护剂探索性实验中,筛选得出的最优冻干保护剂为:15%Sucrose+15%Lactose+4%PVP,其滴度损失比原保护剂减少约0.40lgTCID50/mL,且与原保护剂相比,新型保护剂的玻璃化转变温度(Tg)提高了约5-10℃,并成功的去除了原保护剂中的动物源成份明胶。在剂型优化中,将100个剂量灌装进30 mL冻干瓶中,并将一次干燥时间延长约16小时后,可成功的将含水量控制在3%以内,从而可大大节约生产成本。
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