【摘 要】
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目的:探讨VEPH1（Ventricular zone-expressed PH domain-containing protein homolog 1）影响皮肤黑色素瘤（Cutaneous melanoma,CM）细胞周期、上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和凋亡等调控机制的研究。方法:选取A375、B16-BL6、B16黑色素瘤细胞系以
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目的:探讨VEPH1（Ventricular zone-expressed PH domain-containing protein homolog 1）影响皮肤黑色素瘤（Cutaneous melanoma,CM）细胞周期、上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）和凋亡等调控机制的研究。方法:选取A375、B16-BL6、B16黑色素瘤细胞系以及人正常皮肤细胞（Ha Ca T）进行体外细胞培养,通过实时荧光定量聚合链式反应（qRT-PCR）检测VEPH1的m RNA表达水平,筛选最具有实验意义的黑色素瘤细胞系,进行转染、分组,共8组:空白组（未经处理）、阴性对照组（转染空白质粒）、VEPH1组（转染过表达VEPH1质粒）、SB-431542组（转染TGF-β受体抑制剂）、VEPH1+SB-431542组（共转染TGF-β信号通路抑制剂和过表达VEPH1质粒）、TGF-β组（转染过表达TGF-β质粒）、VEPH1+TGF-β组（共转染过表达TGF-β质粒和过表达VEPH1质粒）、si-VEPH1组（转染si-VEPH1质粒）,采用q RT-PCR、Western Blot检测各组转染细胞系中VEPH1、Smad4、TGF-β、EMT相关蛋白的m RNA和蛋白的表达水平;采用流式细胞术检测各组转染细胞系的细胞周期、凋亡情况。结果:A375黑色素瘤细胞系中VEPH1表达水平最低（P<0.05）;在皮肤黑色素瘤细胞系中VEPH1和E-钙粘蛋白的mRNA和蛋白表达水平降低,而TGF-β、Smad4、波形蛋白和N-钙粘蛋白的表达水平升高（P<0.05）;过表达VEPH1促进上皮标志物E-钙粘蛋白的表达,抑制TGF-β、Smad4和间质标志物N-钙粘蛋白、波形蛋白的表达;过表达VEPH1通过下调TGF-β信号通路可抑制皮肤黑色素瘤细胞的周期,促进皮肤黑色素瘤细胞的凋亡。结论:VEPH1在皮肤黑色素瘤中呈低表达;过表达VEPH1通过TGF-β信号通路可抑制皮肤黑色素瘤细胞的周期、EMT,促进皮肤黑色素瘤细胞的凋亡。
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