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肿瘤在侵袭转移过程中遇到一系列自然屏障,如包括间质结缔组织和基底膜的细胞外基质(ECM)。瘤细胞要穿过这个屏障需依赖于能降解ECM成分的酶的活性。因此,研究肿瘤浸润和转移的重点之一就集中在瘤细胞产生和分泌的蛋白酶上。近年发现基质金属蛋白酶(MMPs)可降解ECM,而体内天然存在的基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)则可抑制MMPs的活性。本实验以基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(TIMP-3)为研究对象,构建携带TIMP-3基因的重组表达载体,转染前列腺癌PC-3M细胞,得到长期稳定表达TIMP-3的细胞株后,观察TIMP-3对肿瘤浸润侵袭以及凋亡的影响。本文采用Trizol法从人胎盘组织中提取总RNA,经过逆转录获得含TIMP-3基因的cDNA,利用PCR技术,从gene bank中获得了TIMP-3的基因序列,设计了该基因的引物,在PCR仪上扩增出一条分子量为633bp的产物。然后我们采用TA克隆载体为中间载体,构建了TA-TIMP-3重组质粒,并转化JM109菌,提取质粒,运用XbaI/EcoRI双酶切,将酶切产物TIMP-3基因回收纯化,连接到表达载体pcDNA3.1上,并转化JM109菌获得成功。将提取纯化的表达载体转染PC-3M细胞,经G418稳定筛选后,提取RNA进行半定量RT-PCR,观察TIMP-3 mRNA的变化,提取总蛋白通过Western blot鉴定TIMP-3蛋白在PC-3M中的表达。然后以稳定转染TIMP-3的前列腺癌细胞PC-3M为研究对象,采用贴壁实验、MTT比色法、迁移实验、单层细胞侵袭实验以及Transwell侵袭实验,对比观察TIMP-3对PC-3M细胞增殖活力和侵袭能力的影响,采用吖啶橙染色法和流式细胞仪观察TIMP-3对PC-3M细胞凋亡的影响。结果表明稳定转染TIMP-3的PC-3M细胞的贴壁率明显低于空质粒组(p<0.01),二者的增殖活力差异显著(p<0.01)。转染TIMP-3组的侵袭细胞数和侵袭指数