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目的 乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，其病因学和发病机制目前尚不十分清楚。但一些研究表明丝裂原活化的蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号途径在乳腺癌的发生起重要作用。 细胞外信号调节激酶（Extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）途径是MAPK中一条主要的和经典的并且与人类癌症关系最为密切的途径。ERK是最初发现的MAPK家族亚类，ERK1与ERK2是其中的两个重要成员，分子量分别为44KDa和42KDa。ERK是一种保守的丝／苏氨酸蛋白激酶，广泛表达于人类的多种细胞。许多生长因子、细胞素、激素及介导有丝分裂、分化的信号均可激活ERK，使其发生磷酸化而活化，进而调节细胞周期及促进细胞增殖、分化，并且具有抵抗细胞凋亡的作用。近来发现，ERK信号转导途径的异常与肿瘤发生发展有关。p-ERK（phospho-ERK），即磷酸化细胞外信号调节激酶，是ERK的活化形式。ERK发生磷酸化后，转入细胞核并通过转录调节引发多种癌基因的相继激活，从而导致细胞的恶性转化。 体外及动物实验表明，ERK的过度激活与乳腺癌细胞在小鼠体内成瘤、转移密切相关。本研究通过检测乳腺癌及癌旁组织中ERK1、ERK2及p-ERK的表达情况，探讨ERK信号蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系，旨在进一步明确ERK途径在人乳腺癌发生发展及转移中的意义，并为乳腺癌患者的预后提供有益的参考指标。 材料与方法 1．材料 免疫组织化学方法共用40例乳腺癌标本，来自中国医科大学第一附属医院及沈阳军区总医院病理科，为1998年6月-2000年10月外科手术标本。标本均经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。Western Blot所用的40例冰冻乳腺癌组织及癌旁正常组织标本来自中国医科大学附属第一临床医院2002年10月-2003年3月外科手术标本，每例标本分成两部分，一部分术后立即置于一70℃冰冻保存，另外一部分石蜡包埋。全部患者均无术前放、化疗治疗史。 2.主要试剂和来源 兔抗人ERK，多克隆抗体（sc一94）、兔抗人ERK:多克隆抗体（sc-154）、鼠抗人p一ERK单克隆抗体（se一383）购自美国Santa Cruz生物技术有限公司。碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗购自北京中山生物技术有限公司。S一P超敏免疫组化试剂盒（KIT一710）、DAB酶底物显色试剂盒（DAB刁030）购自福州迈新生物技术开发公司。碱性磷酸酶标记的羊抗鼠二抗和BCIP/NBT显色试剂盒购自华美生物工程公司。 3.方法 3.1 western Blot取新鲜样品（约3rnm，）加裂解液，剪碎，匀浆超声处理，高速低温离心提取上清蛋白，电泳，转印，经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。图像扫描，测定ERK，、ERKZ及p一ERK蛋白的灰度值。 3.2免疫组织化学方法检测采用链菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组化法（即S一P法）。结果判定:每张切片在光镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个瘤细胞。着色强度分为，无色为O分、浅黄色和黄色为1分、棕黄色为2分。阳性细胞数分为小于10%为0分、10%一50%为1分、大于50%为2分。两项合计乘积0分为阴性（一），1分一2分为弱阳性（+），4分为强阳性（++）。 4.统计学分析 采用sPss for windows xo.o统计学软件，进行xZ检验、pearson相关性分析。Westem Blot图像的灰度值采用配对T检验。P<0 .05有统计学意义。实验结果 1.乳腺癌组织中ERK;、ER乓、p一ERK蛋白的表达 Westem Blot结果显示，40例乳腺癌组织中ERKI、ERK:、p一ERK蛋白表达水平明显高于正常乳腺组织（P<0.01），分别为正常乳腺组织的1 .32倍、1.53倍和4.27倍。 免疫组织化学分析显示，ERK，与ERK:蛋白主要分布在乳腺癌细胞胞浆内;p一ERK蛋白阳性表达位于乳腺癌细胞内，主要呈核型，少数呈核浆型。乳腺癌中ERK、、ERK:、p一ERK蛋白表达的阳性率分别为85 .0%（34/如）、90 .0%（36/4o）、82.5%（33/40）。检测40例乳腺癌标本中p一ERK的表达情况，20例ERKI高表达的乳腺癌组织中有18例p一ERK呈高表达;24例ERK:高表达的乳腺癌组织中有18例p一ERK呈高表达。 ERK;和ERKZ的蛋白表达水平与p一ERK蛋白表达水平一致（P<0 .05）。 2.乳腺癌中 ERKI、ERK:和p一ERK蛋白表达与各临床指标的关系 研究发现，ERK;、ERKZ和p一ERK蛋白过表达与乳腺癌临床病理分期有明显相关性，班期乳腺癌组织中，ERK，、ERKZ与p一ERK蛋白表达高于I期与n期，差异有显著性（P<0.05）。我们还发现，ERKI、ERK:和p一ERK蛋白表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移具有明显相关性（P值分别为0.016、0 .013和0.019）。 ERK，、ERKZ和p一ERK蛋白表达与乳腺癌的组织学类型和雌、孕激素受体的状态无关（P>0.05）。 3.乳腺癌中ERK:和ERK:蛋白表达的相关性 Pealson相关性检验显示乳腺癌中ERKI与ERK:蛋白表达水平呈线性正相关（r二0.456，P<0.01）。讨论 MAPK级联是细胞内信号转导的重要途径，经典的MAPK信号转导途径传递信号包括:受体酪氨酸激酶和适配体蛋白*Ras*Raf二Mek一ERKI/ERKZ*转录因子、细胞增殖、转化等相关基因表达。ERK