前言 肿瘤血管生成与肿瘤的生长及转移密切相关。肿瘤细胞通过合成分泌血管生成因子调节肿瘤组织的血管生成。在这一过程中，血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)作为最重要的血管生成因子之一，起到了重要作用。VEGF既是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，也是目前所知的血管生成因子中唯一能提高血管通透性的因子，它可以直接或间接地作用于每一个环节以促进血管新生。在肿瘤生长过程中，肿瘤细胞分泌血管生长因子的能力急剧增加，肿瘤细胞合成和分泌的VEGF与邻近的宿主血管上的VEGF受体结合诱导内皮细胞合成大量的蛋白水解酶，降解宿主血管基底膜，削弱了其屏障作用。此外，VEGF增加血管通透性，促进血浆成分包括大量的纤维蛋白原渗出，形成内皮细胞粘附移行所必需的新基质。同时，内皮细胞在VEGF的刺激下增殖移行，穿破母血管基底膜沿新的细胞外基质向刺激源移行，延伸进肿瘤组织，交叉吻合形成肿瘤的供血血管网。一方面，丰富的新生血管网输送氧气、营养，转运代谢产物，满足肿瘤组织无限生长的需要；另一方面，血管通透性的提高及新生血管基底膜的不完整也为肿瘤浸润、转移提供便利条件。 近些年来，肺癌在全球范围内呈明显的上升趋势，已经成为一个世界性的难题。浸润和转移是肺癌死亡的主要原因。本实验应用免疫组织化学与Western Blotting方法检测非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)及癌旁组织中VEGF在蛋白水平的表达情况，了解其与非小细胞肺癌的组织学分型、病理分期、淋巴结转移和生存时间的关系，为探讨肿瘤的发病机理，指导临床治疗，提高平均生存期提供有意义的依据。 材料与方法 标本：免疫组化所用49例非小细胞肺癌组织蜡块来自辽宁省肿瘤医院 1999年 11月一2000年 2月外科手术切除并有随访资料的标本。随访日期从患者出院日期起计算，终止日期为 2002年 3月。Western Blottins法所用的 20例冰冻肺癌组织标本来自中国医科大学附属第一临床医院2001年3月一2001年6月外科手术标本，该部分病例同时做免疫组织化学染色。试剂：兔抗人VEGF多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司；S－P试剂盒和DAB试剂盒购自福建迈新生物技术公司；碱性磷酸酶标记的羊抗免二抗购自北京中山生物公司；其余试剂均为国产分析纯。方法：免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶法门一P法人Weste。Blotting法按范培昌编著的《生物大分子印迹技术和应用》操作。结果判定：免疫组化：以肿瘤细胞胞浆出现特异性棕黄色着色为阳性表达。按着色强度计分：无着色为0分，浅黄色为二分，棕黄色为2分。按着色细胞百分数计分：＜10％为0分，＞10助一＜轧院为二分，生的动一＜刀％为2分，＞m％为3分；将着色强度计分与着色细胞百分数计分相乘，总计分口分为阴性（刁；二一3分为弱阳性（十八 4分以上为强阳性（＋十八 WesternBlotting：33－46KD附近出现的特异性条带为VEGF表达阳性。紫外凝胶成像及分析系统扫描，读取并比较蛋白印迹灰度值。统计学分析：采用 SPSS for windowslo．0统计分析软件。阳性率的比较采用 X’检验，Kaplan－Meter绘制生存曲线，og－rank检验差异性，COX模型进行多因素分析。 ·2· 实验结果， VEGF阳性染色定位于癌细胞胞浆中，阳性产物呈弥漫或散在的棕黄色颗粒。癌旁正常组织呈阴性或偶见弱阳性表达。门）VE肝在NSCLC组织有较高水平表达62．32％（43／69），明显高于癌旁组织7．25啪（5／69），两者之间差异非常显著，P＜0．0二。（2）＊＊＊F的表达水平在不同年龄、不同性别间差异无显著性，P＞0 05。o）VEGF的表达水平与肿瘤组织的病理类型无关，69例NSCLC中VEGF阳性表达率为，腺癌79．17％（19／2），鳞癌引．35畅（19／37），腺鳞癌62．50啪（5用），差异无显著性，P＞o．05。KwEGF在 NSCLC表达阳性率与临床病理分期有关，I期十11期＊．57％（17乃5），皿期十w期＊．们畅（2604），P＜0．05。（5）VEGF在高、中分化肺癌中的表达率为 61．54％门2巧2厂而低分化的表达率为64．71％O1八 厂两者之间差异无显著性。N）VEGF在淋巴结转移组的阳性率为75．68％p8乃7X无淋巴结转移组的阳性率为 46．88％门乃2人两者之间差异有显著性，P＜0．05。（）VEGF表达阳性者平均生存时间为12．50。＊53月，明显低于＊＊切表达阴性者20．16上二．32月，差异非常显著，P＜0．0二。 Western Blottting结果：不同组织分型的肿瘤组织均呈现特异性条带，正常肺组织无特异性条带或弱表达。紫外凝胶成像及分析系统扫描结果显示，肿瘤组织的蛋白印迹灰度值均高于正常肺组织的，低分化组织的蛋白印迹灰度值略高于高分化组织的。 讨 论 实体瘤的生长一般可分为两个阶段：1．无血管阶段，此时肿瘤生长十分缓慢，不浸润也不再转移；2．肿瘤诱导宿主长出毛细