肝硬化(hepatic cirrhosis)是由多种原因引起的肝脏损害,表现为肝细胞变性坏死,纤维组织增生,肝细胞结节状再生,肝小叶结构变形,血液循环途径被改建,最终导致肝硬化。根据病因分类,肝硬化主要有病毒性肝硬化、酒精性肝硬化、胆汁性肝硬化、自身免疫性肝硬化及隐原性肝硬化等。我国以病毒性肝硬化为主,其中主要为乙型肝炎病毒感染造成,很多病人无法长期规范化治疗最终致肝硬化。肝硬化病人有门脉高压和肝功能障碍,病人常因消化道大出血和肝性脑病死亡。因此,肝硬化治疗是一项长期艰巨的任务,有效的方法为肝移植,因肝脏供体少,临床工作难以大量展开,越来越多的研究者致力于研究能替代肝移植的方法,间充质干细胞成为新的方向。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)属于干细胞家族,主要存在于骨髓、脐带、脐血和胚胎中。因具有多向分化潜能、造血支持、免疫调控和自我复制等特点,受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外诱导条件下可以分化为骨、软骨、脂肪、肌肉、肌腱、神经、类肝细胞、心肌等组织细胞,连续传代后仍具有多向分化潜能,可作为理想种子细胞用于炎症病变及衰老引起的器官修复。骨髓间充质干细胞应用于临床较早,但抽取骨髓为有创性检查,增加了病人痛苦,越来越多的学者致力于研究脐带来源的间充质干细胞。脐带间充质干细胞来源广泛,收集脐带为无创操作,且治疗肝硬化有促进肝脏再生、提高患者生活质量的作用,在临床上应用越来越受到重视。目的:制备足月顺产胎儿脐带来源的间充质干细胞,探讨体外分离、培养、鉴定方法,观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化的临床疗效。方法:无菌条件下采集新生儿脐带,经过分离,培养获得间充质干细胞,流式细胞仪表面抗原测定(CD29、CD105、CD34、CD45);选择50例肝硬化患者,26例患者在内科治疗基础上经前臂静脉或肝动脉插管进行MSCs移植,术后定期检测肝功能、凝血功能及临床症状,并观察同期的症状体征和不良反应,同时随机选择24例仅以内科治疗的肝硬化患者做为对照组,两组间进行比较。结果:(1)培养的脐带间充质干细胞呈长梭形、旋涡状生长。P1代消化后传代,贴壁时间约48h左右,2-3W长满80%。P6代以内的细胞增殖无明显差异。P3-P6代生长速度较快,24h贴壁,48h长满70%,72h长满80%,P3-P6代内无明显分化。(2)细胞免疫表型显示表达间充质干细胞的特异性标记CD29;但不表达造血干细胞表面标记CD34、CD45。这与骨髓间充质干细胞的表型一致。(3)脐带间充质干细胞移植后,治疗组ALB、PA和Fbg水平比对照组明显升高(P﹤0.05),PT时间与对照组相比明显降低(P﹤0.05)。(4)治疗组患者从治疗后1周开始,乏力、腹胀、纳差明显好转,12周后患者腹水明显减少。26例移植患者术中未出现严重不良反应,无与移植相关的严重并发症。结论:(1)本实验用双酶消化法分离出间充质干细胞,经过冻存、复苏后细胞损伤小,多次传代后细胞分化少,增殖能力稳定。(2)人脐带间充质干细胞经过流式细胞仪测定后,表达间充质干细胞的表型,不表达造血干细胞表型,与骨髓来源的间充质干细胞检测一致。(3)人脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化,可提高患者ALB、PA、Fbg,缩短PT,改善了患者的临床症状。(4)人脐带间充质干细胞移植肝硬化患者,具有良好的安全性。