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实验目的：本实验从胚胎发育的培养基中氨基酸净消耗及净生成率的研究出发,来研究氨基酸在小鼠胚胎体外培养过程中含量的变化,有利于发现胚胎培养基中氨基酸的最佳含量需求,以提高小鼠胚胎体外发育的质量和囊胚率。在胚胎发育中研究中具有重要意义,并为后续研究提供更多的、高质量的胚胎。实验方法：1采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,RP-HPLC经梯度洗脱后检测KSOMaa中17种氨基酸的含量,这17种氨基酸分别是：组氨酸、精氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸。2研究了在KSOM培养基中添加在氨基酸条件下,分别培养胚胎至植入前的各个时期。选取胚胎发育率高的培养液滴,将胚胎移去,吸取培养基至于1ml离心管中-20℃保存。通过反相高效液相色谱法(HPLC)分析小鼠植入前胚胎体外培养各个时期培养基中氨基酸浓度变化；3、研究了氨基酸在不同囊胚率变化情况。实验结果：1 17种氨基酸在35min内得到很好的分离。18种标准AA在0.125～0.525pmol/μL范围内有良好的线性关系,各氨基酸的相关系数为0.9937-0.9990之间。加标回收率在95.48%-103.64%。检测限在1.25-8pmol/ul之间。表明该方法具有灵敏度高、操作简单的特点,适用于检测培养基中氨基酸含量。2在胚胎发育不同时期含量变化不同的氨基酸可以大致分为5种类型：1：在2细胞期急剧增加而在4细胞以及8-16细胞减少,但在囊胚期又增加明显,属于这一类型的有：甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸；2：在胚胎发育各个时期持续下降,这一类型的氨基酸有：谷氨酸和甲硫氨酸；3：在胚胎发育各个时期持续增加,这一类型的氨基酸有：丝氨酸和赖氨酸；4：在胚胎发育2细胞期含量减少或者变化不大而在以后的各个时期持续增加,这一类型的氨基酸有：天冬氨酸、脯氨酸、色氨酸；5：在胚胎发育囊胚期减少,而在之前的各个时期都有增加,这类氨基酸只有异亮氨酸。囊胚率越高,氨基酸含量变化越明显。