【摘 要】
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目的1.通过研究人类鼻咽癌亲本细胞与紫杉醇耐药细胞中TXR1的表达情况,及TXR1的表达与鼻咽癌紫杉醇耐药的相关性,探讨其与紫杉醇耐药的关系。2.筛选高效抑制TXR1基因表达的si
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目的1.通过研究人类鼻咽癌亲本细胞与紫杉醇耐药细胞中TXR1的表达情况,及TXR1的表达与鼻咽癌紫杉醇耐药的相关性,探讨其与紫杉醇耐药的关系。2.筛选高效抑制TXR1基因表达的siRNA,用于鼻咽癌紫杉醇耐药逆转的研究。方法1.从鼻咽癌亲本及紫杉醇耐药细胞中提取RNA及蛋白质,用荧光定量RT-PCR、Western-blot方法分别在mRNA水平及蛋白水平来检测鼻咽癌细胞中TXR1的表达情况。2.通过1ip2000载体将TXR1基因的siRNA导入鼻咽癌耐药细胞,24小时后提取的蛋白质,来检测不同siRNA对TXR1表达的影响。结果1.TXR1在鼻咽癌亲本细胞、紫杉醇耐药细胞中均有表达,及耐药细胞中TXR1的含量比相对应亲本细胞中的含量高,且与耐药指数呈正相关(P2=0.979)。2.四条TXR1基因的siRNA (siRNA TXR1-22、TXR1-311、 TXR1-654、Negative control FAM),通过lip2000分别转染鼻咽癌紫杉醇耐药细胞HNE-2/Taxol,转染24h后,提取蛋白,利用Western blot技术在蛋白水平检测不同siRNA对靶基因TXR1表达的影响,结果显示TXR1-22对靶基因的抑制作用最强。3. Negative control FAM转染的细胞在倒置荧光显微镜下计数,得到较高的转染率(>85%),间接说明lip2000转染效率高。结论1.TXR1在紫杉醇耐药细胞中的含量高于鼻咽癌亲本细胞,说明TXR1可能与紫杉醇耐药有关,并为临床上逆转紫杉醇耐药奠定了基础。2.在蛋白质水平,siRNA TXR1-22是所有设计的siRN中对TXR1抑制最强,这为后续的实验奠定了基础。
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