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目的:本实验的目的是探究低强度超声作用于体外白介素1β因子刺激下大鼠颞下颌软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的变化,以及LIPUS对颞下颌软骨细胞的骨保护作用。方法:取4周龄Wistar大鼠髁突软骨细胞,于体外培养。在无菌的条件下,取双侧髁突组织,用含有双抗的PBS,冲洗、剥离髁突软骨,反复剪切至1mm3大小,首先在37℃环境下用0.25%浓度的胰蛋白酶消化30分钟,然后37℃振荡加入浓度为0.2%的Ⅱ型胶原酶,1-2小时消化完后、分离原代软骨细胞并培养,原代软骨细胞生长、形态变化,通过每天用倒置光学显微镜观测,并用细胞形态学、Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色方法,来鉴定培养结果。随机将髁突软骨细胞第二代分为四组,分别用0、1、5、1Ong/mlIL-1β处理48小时,对各组之间 Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型胶原、AGG蛋白和mRNA表达量进行检测,并筛选出能造成髁突软骨细胞炎性状态的IL-1β最佳浓度和检测IL-1β改变对于Wnt/β-catenin通路的不同影响;取已鉴定的髁突软骨细胞P2随机分为五组:对照组,细胞不做任何处理;IL-1β组,10ng/mlIL-1β 处理 48 小时;LIPUS 组,10ng/mlIL-1β 处理 48 小时后 LIPUS每天处理20分钟,共七天。空白质粒+LIPUS组:10ng/mlIL-1β处理48小时,提前48小时加入空载质粒后LIPUS每天处理20分钟,共七天。siRNA+LIPUS组:10ng/mlIL-1β处理48小时,提前48小时加入DKK1干扰质粒siRNA后LIPUS每天处理20分钟,共七天。分别用western blotting检测各组之间Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型胶原、AGG 的蛋白表达量;qRT-PCR检测各组 Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、DKK1、Ⅱ型胶原、AGG mRNA表达量;倒置荧光显微镜观测siRNA对于软骨细胞的转染情况。结果:(1)消化髁突,提取软骨细胞接种,观察见细胞呈形态规则、小圆形。一天后,细胞多数贴壁,镜下观察可呈多边形或者星形;5天后,可观察到"铺路石"样。经一次传代后,细胞贴壁的速度明显变快,匀称分布;据我们观察在4代以内,软骨细胞增殖速率较快。在此以后,髁突软骨细胞呈长梭形,出现"去极化"现象,生长速度加快。胞浆内可见有棕黄色颗粒和红色荧光颗粒,通过Ⅱ型胶原免疫细胞化学和细胞免疫荧光染色发现。(2)1Ong/mlIL-1β降低髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和AGG表达的效果最明显,对于Wnt/β-catenin通路有显著促进作用,同时DKK1表达升高。(3)低强度超声干预炎性髁突软骨细胞后,collagenⅡ、AGG表达水平明显升高,Wnt3a、β-catenin、GSK3β下降,DKK1表达升高;低强度超声干预并加入DKK1干扰RNA后,DKK1,collagenⅡ、AGG表达水平下降,Wnt3a、β-catenin、GSK3β表达升高。结论:低强度超声通过抑制Wnt/β-catenin信号通路并且刺激细胞外基质的产生,一定程度上阻断并抑制了骨关节炎退行性变化,对骨关节炎有潜在的治疗保护作用。本实验增强了低强度超声对于骨关节炎的潜在骨保护作用的认识理解,并且需要更多的临床研究用于证实这一效果,为临床治疗TMJ-OA提供新方式。