近年来,磁性纳米颗粒以其独特的优势在食品安全检测领域得到了越来越广泛的研究,如:用于检测前的样本预处理及免疫检测的指示标记等。本文基于磁性纳米颗粒的独特磁学及光学性质,尝试建立了多种新型的以免疫磁性纳米颗粒为探针的免疫层析法,主要包括大体系的双抗夹心型免疫层析法、用于检测大分子靶标的竞争型免疫层析法以及“两步免疫层析法”。上述方法分别应用于食品安全相关的靶物质检测中,与常规方法相比,均显示了诸多优势。各章内容分述如下:本研究第一章,研究综述了磁性纳米颗粒、免疫层析技术及它们在食品安全领域的应用现状。在第二章中,研究通过制备灭活全菌及外膜蛋白提取物作为免疫原,免疫多只日本大耳兔后得到了抗沙门氏菌的多克隆抗体。整个抗体制备周期最短为25d,经估算,免疫过程结束后单只兔子产生的抗沙门氏菌抗体产量均在183.7 mg以上,最大抗体产出量为466.7 mg。至血清收获时,Q1兔抗血清的有效稀释倍数为12800000倍,效价较高。所制备的抗体(共五种)均能与A、B、C1、D、E1各群代表菌株有不同程度的结合,不漏检,在免疫学检测及免疫学样本前处理中有较好的应用前景。在第三章中,研究采用沙门氏菌外膜蛋白提取物及沙门氏菌破碎菌体制备免疫原,经一系列步骤后得到能分泌沙门氏菌抗体的单克隆细胞系44株。其中,有16株细胞分泌的抗体针对不同沙门氏菌血清型具有较高的特异性,与属内其余受试血清型无交叉反应。其余多数细胞株分泌的抗体能结合除猪霍乱沙门氏菌外的分属四个群的所有模式血清型。研究得到的多株高特异性的抗体与其余受试沙门氏菌无交叉反应,可以被应用到沙门氏菌血清型的快速鉴定及某些需要定性沙门氏菌具体血清型的检测场合。而不同单克隆抗体经互相补充,也有望被应用到沙门氏菌属的免疫学快速筛查中。第四章中,研究基于免疫磁性纳米颗粒外加磁场可回收和在NC膜上聚集后裸眼可见的特点,建立了可有效浓缩大体系样本的免疫层析检测法,其中免疫磁性纳米颗粒作为探针,既是浓缩处理样本的工具,又同时作为免疫层析的标记物。优化了探针标记pH、封闭剂、探针在NC膜上的最大上样量等。相比常规方法,探针在捕获到待检物后无需传统洗脱步骤直接用免疫层析法检测,检测结果裸眼可读。用于检测肠炎沙门氏菌的灵敏度为1.95×105CFU/mL,较之于无富集的磁性纳米颗粒免疫层析法和胶体金免疫层析法,灵敏度分别提高10倍、1000倍。此外,研究条件下,即便探针用量为50 μg/次,方法单次检测抗体使用量仅为3μg,少于传统的胶金免疫层析法(4.8μg),显示出了磁性纳米颗粒作为标记物有着较强的经济及产业价值。第五章,研究在磁性纳米颗粒上偶联抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体,通过检测线(T线)喷涂猪霍乱沙门氏菌外膜蛋白,利用待检物与T线抗原的竞争关系,创新性地建立了针对大分子靶标的竞争型免疫层析法,用于猪霍乱沙门氏菌的检测。方法灵敏度为1.2×107CFU/mL,可满足过夜增菌后的猪霍乱沙门氏菌的检测要求。且本法与常见的3种其他沙门氏菌和18种非沙门氏菌无交叉反应,展现出了良好的特异性。方法容易建立,有效规避了建立双抗夹心法时涉及到的抗体配对困难的问题。采用竞争法检测大分子靶标,也潜在地避免了双抗夹心法中的“Hook效应”对检测结果准确性的不良影响。第六章,基于磁性纳米颗粒,研究建立了新型的两步免疫层析法,高抗体偶联量的免疫磁性纳米颗粒用于捕获原料乳中的黄曲霉毒素M1(AFM1),热洗脱后采用低偶联量的免疫纳米颗粒指示结果。方法显示了较高的灵敏度(0.02μg/L),通过裸眼判读,满足了欧盟等国对于生牛奶及相关食品中AFM1的检测要求,在采用相同的抗原抗体条件下,相比于常规的免疫磁性纳米颗粒及胶体金标记的免疫层析法,本方法灵敏度分别提高了 25及50倍;准确性上,本方法在不同样本间与ELISA结果一致;所建立方法经济方便、操作简单、无需精密仪器设备且安全环保,适合基层AFM1的现场筛查。