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研究目的采用hTSHR-A亚单位重组质粒结合电穿孔免疫BALB/c雌性小鼠,和hTSHR-A亚单位活化的脾细胞免疫同源BALB/c雌性小鼠两种方法建立Graves眼病小鼠模型,评估优选出更加理想的Graves眼病小鼠模型;并观察平目汤对Graves眼病小鼠模型的疗效。研究方法第一章Graves眼病小鼠模型的建立第一部分采用hTSHR-A亚单位重组质粒结合电穿孔免疫BALB/c雌性小鼠的方法建立Graves眼病小鼠模型。第二部分采用hTSHR-A亚单位活化的脾细胞免疫同源BALB/c雌性小鼠的方法建立Graves眼病小鼠模型。实验结束,观察小鼠眼部外观变化;MRI扫描并通过Image J软件分析测量小鼠眼外肌体积变化;ELISA检测小鼠血清甲状腺激素水平和抗体TRAb水平;病理染色观察小鼠甲状腺和眼眶组织学变化;电子分析天平称量小鼠眼球后脂肪组织及眼球重量并计算百分比。比较两种方法建立的Graves眼病小鼠模型,通过评估优选出更加理想的Graves眼病小鼠模型。第二章平目汤干预Graves眼病小鼠模型的疗效观察构建优选的Graves眼病小鼠模型,方法同第一章。检测血清TRAb,阳性表达小鼠作为模型,随机分为模型组、平目汤低剂量组(平低组)、平目汤中剂量组(平中组)、平目汤高剂量组(平高组)四组。平目汤低中高三个剂量组灌胃30天后,ELISA检测小鼠血清甲状腺激素水平和抗体TRAb水平;HE染色观察小鼠甲状腺和眼眶组织学变化;电子分析天平称量小鼠眼球后脂肪组织及眼球重量并计算百分比。研究结果:第一章Graves眼病小鼠模型的建立第一部分hTSHR-A亚单位重组质粒结合电穿孔免疫BALB/c雌性小鼠建立Graves眼病小鼠模型。1.实验结束,模型组3/12(25%)的小鼠眼部出现眼裂增宽,结膜、眼睑水肿,结膜充血,眼球突出。2.MRI扫描检测显示模型组3/4只小鼠眼外肌体积增大。3.和空白组(Ctrl)、空质粒组(GV219)相比,模型组小鼠血清FT4水平明显升高(P<0.05),其中4/12(33.33%)高于正常参考范围上限(空质粒组`x+2S);血清TSH水平明显降低(P<0.05),其中5/12(41.67%)低于正常参考范围下限(空质粒组`x-2S);血清TRAb水平明显升高(P<0.05或P<0.01),其中5/12(41.67%)高于正常参考范围上限(空质粒组`x+2S)。4.和Ctrl、GV219组相比,模型组小鼠眼球后脂肪与眼球重量的百分比明显升高(P<0.01)。5.模型组7/12(58.33%)小鼠出现了甲状腺组织学改变,甲状腺滤泡上皮细胞增生,部分腺泡腔内物质吸收,有数量不等的淋巴细胞浸润,少数滤泡破坏,可见滤泡上皮细胞呈乳头状向腔内突起。6.模型组6/12(50%)小鼠发生眼眶组织病理学改变,眼球后大量脂肪细胞堆积,脂肪细胞间隙增宽,肌纤维排列紊乱、断裂,肌纤维间、脂肪细胞间蓝染的胶原纤维增多、粘液物堆积,肌间隙脂肪组织增生、堆积,肥大细胞浸润明显。第二部分hTSHR-A亚单位活化的脾细胞免疫同源BALB/c雌性小鼠建立Graves眼病动物模型。1.模型组(注射hTSHR-A亚单位重组质粒免疫小鼠活化的脾细胞10~6个)1/12(8.33%)小鼠眼部出现结膜、眼睑水肿。2.MRI扫描检测显示模型组2/3只小鼠眼外肌体积增大。3.和对照组(注射空质粒免疫小鼠活化的脾细胞10~6个)相比,模型组小鼠血清FT4水平明显升高(P<0.05),其中1/12(8.33%)高于正常参考范围上限(对照组`x+2S),血清TSH水平明显降低(P<0.01),其中3/12(25%)低于正常参考范围下限(对照组`x-2S);血清TRAb水平有升高,但无统计学意义(P>0.05)。4.和对照组相比,小鼠眼球后脂肪与眼球重量的百分比明显升高(P<0.05)。5.模型组8/12(66.67%)小鼠甲状腺上皮细胞因受压而变扁平,甲状腺滤泡上皮细胞有明显的肥大和增生,同时伴有数量不等的淋巴细胞浸润。6.模型组7/12(58.33%)小鼠发生眼眶组织病理学改变,眼球后可见大量脂肪细胞堆积,脂肪细胞间隙增宽,肌纤维排列紊乱、断裂,肌纤维间和脂肪细胞间蓝染的胶原纤维增多,肌间隙脂肪组织增生、堆积,肥大细胞浸润明显,脂肪细胞间粘液物堆积。第二章平目汤干预Graves眼病小鼠模型的疗效观察145只造模小鼠,其中有59只小鼠血清TRAb水平高于正常参考范围上限(空白组`x+2S),作为模型小鼠,并随机分组,用药观察,结果显示:和模型组相比,平目汤不同剂量干预后血清FT4水平均有不同程度下降,其中平中组下降明显(P<0.05);血清TSH水平均有上升,其中平中组较明显(P=0.05);各组血清TRAb明显下降(P<0.01);平中组和平高组眼球后脂肪组织和眼球重量的百分比明显下降(P<0.05或P<0.01);眼眶组织病理学显示,平目汤不同剂量组小鼠眼球后脂肪细胞堆积、淋巴细胞浸润较空白组多,较模型组减少;甲状腺组织病理学显示,平目汤不同剂量组小鼠甲状腺部分滤泡腔内物质吸收,滤泡腔可见均匀红染的胶质,间质较多,有数量不等的淋巴细胞浸润,浸润程度较空白组多,较模型组少。研究结论1、hTSHR-A亚单位重组质粒结合电穿孔免疫BALB/c雌性小鼠建立的Graves眼病小鼠模型和人类Graves眼病病理学特征及血清学表达更为接近。2、平目汤可有效降低Graves眼病小鼠模型血清FT4、TRAb水平,一定程度升高血清TSH水平,改善甲状腺炎症,有效减轻眼球后脂肪组织积聚。