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目的:1 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对体外培养的兔肺动脉平滑肌细胞(RPASMCs)增殖的影响;2 观察PDTC对RPASMCs细胞周期的作用;3 观察PDTC对RPASMCs细胞周期蛋白cyclinD1 mRNA表达的影响。
方法:原代培养RPASMCs,采用免疫组化SABC法检测鼠抗人α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMA)表达进行细胞鉴定;经不同浓度的PDTC作用不同时间后,应用MTT法观察不同浓度PDTC(1.25、5、20μmol/L)对RPASMCs增殖的影响;流式细胞仪检测高浓度PDTC(20μmol/L)对RPASMCs细胞周期进程的调控作用;RT-PCR法检测不同浓度PDTC(1.25、5、20μmol/L)作用下RPASMCs cyclinD1 mRNA表达水平。
结果:原代培养的RPASMCs形态及鉴定:传代细胞经免疫组化SABC法检测α-SMA,可见95[%]以上细胞被染色,细胞质中的细丝被染成棕黄色,为平滑肌细胞肌动蛋白特异表型标志,位于细胞中央的椭圆型细胞核被苏木精染成浅蓝色,证实所培养细胞为平滑肌细胞。MTT方法检测显示:1.25、5、20μmol/L PDTC干预10[%]FBS刺激下的RPASMCs 12、24、48h后,与10[%]胎牛血清(FBS)组相比,RPASMCs的体外生长活性被不同程度地抑制,不同时间点之间以及不同浓度组之间两两比较P<0.05,表明该抑制作用呈浓度、时间依赖性。流式细胞仪细胞周期分析结果显示:与10[%]FBS组相比,20μmol/L PDTC有效阻止RPASMCs进入S期(P<0.05),使滞留在Go/G1期的细胞比例增高(P<0.05),但对G2/M期影响较小。RT-PCR检测显示:与10[%]FBS组比较,1.25、5、20μmol/L PDTC组cyclin D1 mRNA表达呈浓度依赖性的减少(分别为:0.374±0.022、0.246±0.026、0.176±0.018,均P<0.05)。
结论:PDTC能明显抑制血清诱导的RPASMCs增殖以及阻滞细胞周期进程,而下调细胞周期蛋白cyclinD1 mRNA表达可能是其机制之一。