本文主要对微生物sp.00菌产穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的分离提纯,提纯酶的底物作用专一性和纯度鉴定以及该酶的性质进行了研究.首先在做TLC展开剂不同比例的筛选实验中,得出展开剂的最佳配比为氯仿:甲醇:水=8:2.5:0.5.为了得到高产穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的菌,从六种微生物中筛选出sp.00菌作为研究对象.该菌产酶能够水解穿山龙薯蓣皂苷的3位碳糖基,制备低糖皂苷或苷元.筛选出穿山龙作为sp.00菌产穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的最佳诱导剂,浓度为15％,最佳发酵时间为5或6天.发酵粗酶液经硫酸铵沉淀、透析后,上DEAE-Cellulose DE52柱(φ2.0×9.0)进行梯度洗脱,可得到提纯酶.提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了纯度检测及蛋白分子量测定,结果提纯酶的收率为2.6％,比活力由发酵粗酶液的14.7上升到57.8,提高了4倍左右.该提纯酶对穿山龙薯蓣皂苷具有很强的底物专一性作用,且其分子量为62 kDa..进行酶性质研究的结果如下:酶反应的最佳底物浓度为1.0mg/ml.最佳酶反应时间为30个小时,最佳反应温度为40℃,酶反应体系的最适pH值是5.0.不同的金属离子及浓度对酶的活性影响:除了Mg<2+>对提纯酶的酶活力影响较小外,其他金属离子对提纯酶的酶活力都有较大影响.Fe<3+>对穿山龙薯蓣皂苷糖苷酶的活性起抑制作用;Ca<2+>低浓度激活,其中10mM最好,高浓度抑制;Zn<2+>浓度为50mM时有抑制作用,其他浓度无太大影响;Cu<2+>高浓度50mM和100mM时抑制.在对穿山龙薯蓣皂苷浸出实验中对条件(酒精度、温度和时间)进行了筛选,最适酒精度、最适温度和最佳时间分别为95％、50℃和6h.提取得到穿山龙薯蓣总皂苷48.5g,得率为2.43％.用硅胶柱层析法从穿山龙薯蓣皂苷混合物中分离得到单体,它的流动相条件为氯仿:甲醇=9:1.根据TLC检测结果,把从硅胶柱中分离得到的单点收集起来,总共1.2548 g,得率为:6.27％.HPLC法检测其纯度为90％左右.