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目的: 探讨RRM2B基因c.420G>C新突变对转录、蛋白表达及蛋白功能各水平的影响,探讨c.420G>C新突变的致病性和致病机制。 方法: 构建RRM2B基因干扰质粒、RRM2B基因过表达质粒及含c.420G>C的过表达质粒,干扰质粒及含突变的质粒同时转染293T细胞,模拟RRM2B基因c.420G>C突变细胞。Real-time PCR检测细胞中RRM2B mRNA含量;Western-blot检测细胞中RRM2B基因编码蛋白含量;提取细胞内线粒体DNA明确线粒体DNA数量。 结果: 1. 构建RRM2B基因干扰质粒(pLVX-shRNA2-shRRM2B)、RRM2B基因过表达质粒(Plvx-IRES-ZsGreen1-RRM2B)、含c.420G>C突变的RRM2B基因过表达质粒 ( Plvx-IRES-ZsGreen1-RRM2B(c.420G>C) ) 。 pLVX-shRNA2-shRRM2B 及Plvx-IRES-ZsGreen1-RRM2B(c.420G>C)同时转染293T细胞,模拟突变细胞。 2. Real-time PCR结果显示突变细胞中的RNA量显著降低,提示c.420G>C可下调RRM2B基因的转录;Western-blot结果显示突变细胞中的p53R2酶含量明显下降,提示c.420G>C可致RRM2B基因在蛋白表达水平下调;测定突变细胞线粒体DNA含量可见细胞中的线粒体DNA含量显著下降,证明RRM2B基因c.420G>C突变可致线粒体DNA耗竭;证明该新突变致病性。 结论: 1. RRM2B基因c.420G>C突变可以导致该基因mRNA转录下降、p53R2表达量下降,最终导致细胞内线粒体DNA含量明显减少。 2. RRM2B基因c.420G>C突变可以导致细胞内线粒体DNA耗竭,临床上表现为线粒体DNA耗竭综合征。