阿尔茨海默病（AD）是以进展性痴呆为主要表现的神经系统退行性疾病，其主要病理特征为细胞外间隙β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积所形成的老年斑（SP）、神经元变性、神经纤维缠结（NFT）以及胶质细胞活化，现在研究认为，AD的这些病理改变都与Aβ密切相关，其中Aβ所致胶质细胞活化及由此引起的炎症级联反应参与AD的病理过程。但Aβ在胶质细胞中作用的分子机制及胶质细胞活化与神经元死亡之间的关系仍不十分清楚。目前，大多通过AD患者死后尸检或采用离体神经细胞原代培养来进行的研究证实了NF-κB与Aβ的神经细胞毒性作用相关性，利用在体动物模型的研究却较少。本研究利用凝聚态Aβ25-35的神经毒性作用对大鼠右侧海马CA1区进行立体定向损伤制作AD动物模型，观察实验动物学习记忆改变及脑组织病理形态变化，测定AD大鼠海马部位神经细胞NF-κB活化，探讨NF-κB活化与Aβ的神经细胞毒性作用相关性，同时对Aβ损伤大鼠予以维生素E防护，探讨维生素E对Aβ神经毒性的保护作用的可能机制，从而为大剂量维生素E用于临床提供理论依据。 <WP=35>一、Aβ海马CA1区损伤AD大鼠模型的建立 Aβ是AD主要病理特征老年斑的核心成分，被认为是多种原因导致AD的共同通路；海马与学习记忆特别是近记忆能力关系密切，在AD早期，新皮质未出现病变前，海马就出现大量NFT及明显的神经元丢失，是AD最易受损的脑区之一。因此，Aβ海马区注射建立AD模型对观察行为学、病理等方面的变化无疑是理想的选择。本实验采用凝聚态Aβ25-35，参照《大鼠脑立体定位图谱》对大鼠右侧海马CA1区（前囱后3.0mm、中线右侧2.0mm、硬膜下2.6mm）进行立体定向损伤，建立AD动物模型，并通过Morris水迷宫实验观察模型鼠学习记忆变化及脑组织病理形态变化。 结果显示：（1）通过立体定向采用微量注射器能将Aβ准确地注射至靶点，损伤成功率高，重复性好。（2）水迷宫实验结果：AD大鼠通过水迷宫实验测试，记忆再现成绩明显下降，与正常对照组相比差异显著（P<0.05）。（3）常规HE染色，生理盐水对照组于针道附近可见胶质细胞轻度增生，皮层及海马部位未见神经元坏死性改变。Aβ损伤组可见神经元数量较对照组明显减少，神经元退化，并出现嗜神经现象。胶质细胞反应性增生。皮层也可见散在单个的固缩细胞。结果说明：通过Aβ对海马CA1区立体定向损伤成功地建立了AD动物模型，部分的模拟了AD学习记忆障碍、部分神经元丢失等行为学和病理学等方面的特征，为在体水平研究Aβ介导神经细胞损伤的始发机制提供时间和空间上较易控制的条件。为探索AD中Aβ的病理损伤机制及药物干预提供了一种针对性较强的模型。二、NF-κB活化与Aβ的神经细胞毒性作用相关性 Aβ来自淀粉样肽前体蛋白，包括39-43个氨基酸，形成与AD患者脑中神经元及血管变性有关的不可溶的纤维聚集物。此蛋白具有神经毒性，在脑内过度表达/沉积被认为是AD发生神经退行性变的原因。然而，Aβ沉积本身不足以引起AD的临床症状。在AD的病程发展过程中，一些炎症相关的因<WP=36>子参与了AD病理进展的几个关键步骤，尤其是老年斑的形成。NF-κB是一种转录因子，最早作为鼠的B淋巴细胞中κ轻链基因表达的调节因子被发现的，因其在炎症免疫反应及细胞分化和凋亡中的广泛作用而为人们所熟知。目前，大多通过AD患者死后尸检或采用离体神经细胞原代培养来进行的研究证实了NF-κB与Aβ的神经细胞毒性作用相关性，利用在体动物模型的研究却较少。本实验采用免疫组化方法对凝聚态Aβ25-35海马CA1区损伤后一周大鼠海马部位NF-κB活性进行了研究，探讨NF-κB活化与Aβ的神经细胞毒性作用相关性。 结果显示：经Aβ25-35损伤后一周海马各区及齿状回可见大量的免疫组化阳性表达神经细胞，以齿状回和CA1明显，与盐水对照组相比，差异显著。 结果说明：凝聚态的Aβ25-35具有较强的毒性作用，使神经元和胶质细胞中NF-κB活性明显增加，在神经元中适度的NF-κB活化可保护神经元免于Aβ的毒性作用，而在胶质细胞中过度活化又可导致炎症级联反应，使神经细胞死亡。证明NF-κB与Aβ的神经细胞毒性作用密切相关。 三、维生素E对Aβ神经毒性损伤的保护作用研究最近的研究认为，氧化应激和类炎症反应参与到AD的致病机理中来。临床应用维生素E治疗AD已取得一定效果。本实验通过Aβ海马CA1区损伤建立AD动物模型，同时对Aβ损伤大鼠予以维生素E防护，观察实验动物学习记忆改变及脑组织病理形态变化，测定AD大鼠海马部位神经细胞NF-κB活化，探讨维生素E对Aβ的神经细胞毒性的保护作用。结果证实维生素E对Aβ神经细胞毒性作用具有保护作用，拮抗 Aβ所致的学习记忆损害及神经细胞死亡。维生素E通过抑制神经细胞中NF-κB活化，从而抑制了一系列炎症免疫反应，使神经细胞免于Aβ的毒性作用，为维生素E应用于临床提供一定的理论依据。