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钙网蛋白（calreticulin，CRT）是内质网中的Ca2+结合蛋白，其可以作为分子伴侣，帮助新生多肽链进行正确折叠，以及参与 MHCⅠ类分子/抗原肽复合物的形成等过程。CRT全长416个氨基酸，由N-domain，P-domain，C-domain三个结构域组成。N-domain是一个凝集素样的球形结构域，能够与具有特定结构的多糖结合。P-domain和C-domain可以结合Ca2+，对维持细胞内Ca2+稳态具有重要作用。CRT的N端的信号肽以及C末端的KDEL序列，使其能够导向并驻留在内质网中。但近年来越来越多的研究发现，CRT还能够在内质网外发挥重要的免疫生物学功能。CRT能够以膜形型式出现在细胞表面，参与凋亡细胞清除以及抗肿瘤免疫应答。CRT还能够以可溶性的形式出现在自身免疫病患者的血清以及关节液等体液中，提示其可能参与自身免疫应答过程。 我们前期的研究发现，重组表达的小鼠CRT片段39-272（recombinant CRT/39-272，rCRT/39-272）具有较强的免疫生物学活性，能够直接激活小鼠腹腔巨噬细胞以及B细胞。rCRT/39-272具有很强的免疫原性，免疫小鼠能够诱导特异性抗体的产生。rCRT/39-272还具有免疫佐剂效应，用融合表达的rCRT-EGFP蛋白免疫小鼠能够诱导产生增强的针对EGFP的体液免疫应答。rCRT/39-272与rCRT全长蛋白相比，两者对小鼠腹腔巨噬细胞和B细胞的免疫刺激活性相似，提示CRT/39-272是CRT的主要功能活性片段。在此研究的基础上，本课题对rCRT发挥免疫学活性的更小功能片段进行了深入研究。 我们利用分子生物学方法对CRT/39-272片段进一步缩小，分别构建了携带不同CRT片段的原核表达载体，并且利用大肠杆菌系统中进行了原核表达与亲和纯化。结果显示，rCRT/150-230是保留CRT的免疫生物学活性的最小功能片段。rCRT/150-230具有良好的可溶性，能够在溶液中以多聚体的形式存在。rCRT/150-230能够有效激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α，并且具有较强免疫原性，能够诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答。rCRT/150-230还能够刺激人的外周血单个核细胞分泌TNF-α。 本研究在前期工作的基础上进一步确定了CRT发挥免疫生物学活性的更小功能片段集中在150-230这一区域，为后续更加深入地探究CRT发挥免疫生物学活性的规律以及分子机制打下了良好的基础。