论文部分内容阅读
应用随机扩增多态DNA(RAPD)标记技术,对福建省7个居群共68个樟树[Cinnanomum camphora(L.)Presl]样本进行遗传多样性和遗传结构分析.结果如下:(1)建立了改进的CTAB法用于樟树总DNA的提取.在常规的CTAB法基础上,采取先破碎细胞收集细胞核,将存在于细胞质中的大量影响DNA提取质量的多酚等次生代谢物除去后再加核裂解液释放DNA,经分离纯化,获得DNA.通过电泳、限制性内切酶消化、PCR扩增以及A<,260>/A<,280>比值的测定,结果表明,用改进的CTAB法提取的DNA完全能满足RAPD分析的要求.(2)建立了用于DNA提取的樟树叶片的保存方法.实验结果表明,用改进的饱和NaCl-CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)溶液保存7d、14d(室温下)的樟树叶片提得的DNA,完整性与纯度都不亚于鲜叶提得的DNA.(3)筛选并建立了适合于樟树RAPD扩增的扩增程序和反应体系.为确保RAPD结果的重复性和真实性,对RAPD反应的变性时间和退火温度进行筛选,确定了扩增程序为:94℃预变性180s;94℃变性30s,,35℃复性90s,72℃延伸120s,42个循环;最后在72℃延伸300s.同时将均匀设计法应用于樟树RAPD反应体系的筛选,对Mg<2+>、dNTP、模板DNA、Taq DNA聚合酶、引物浓度等5个因素进行两次均匀设计试验,确定了反应体系为:在20μL总反应体积中,含MgCl21.5 mmol/L,dNTP 0.2mmol/L,模板DNA8 ng/μL,Taq DNA聚合酶1U,引物0.2 μ mol/L.(4)筛选的21个随机引物对7个居群共68个樟树样本进行RAPD扩增,共检测到168条条带,其中多态性条带为75条,多态性条带百分率(PPB)占44.64％.7个樟树居群中邵武居群(SW)的多态性条带百分率最大,为33.33%,最低的是福建林科院优树居群(YS),为22.62%.居群间的Shannon多样性指数(I)、Neis基因多样度(h)和遗传分化系数(Gst)分别为0.2496、0.1688和0.3498,表明樟树居群间的遗传多样性水平不高.AMOVA分析显示居群间的变异组分为28.55%,而71.45%的变异组分存在于居群内.UPGMA聚类结果将7个居群分为两大支,第一支包括福州(FZ)、邵武(SW)、顺昌(SC)和永安(YA)四个一般居群,第二支包括建欧(JO)、浦城(PC)、福建林科院(YS)三个优树居群.