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产T-2毒素镰孢菌广泛存在于自然环境中,并威胁着水产养殖业的健康。凡纳滨对虾为我国南方沿海城市湛江的主要养殖水产品之一,考察T-2毒素在对虾养殖环境中的发生情况及其在对虾体内的蓄积毒性不仅仅是对虾养殖业的迫切需求,更是保证食品安全的前提条件。本研究从对虾养殖环境中分离得到27株镰孢菌,选取一株镰孢菌产毒培养后提取纯化其代谢产物,用红外光谱、核磁共振光谱分析,证明了其产物为T-2毒素,并且通过产毒菌株自主获得的T-2毒素,为进一步毒性实验提供材料支持。研究表明对虾养殖环境中普遍存在产T-2毒素镰孢菌,给凡纳滨对虾养殖带来潜在危害,对T-2毒素的生物控制具有重要意义。因此,本实验以对虾养殖环境中的5株镰孢菌产毒分离株为对象,考察其产毒培养过程中T-2毒素的变化,分离到2株T-2毒素降解菌,经16S rRNA鉴定结果分别为弯曲假单胞菌和尼泊尔葡萄球菌,对T-2毒素的降解率分别为90.9%和85.5%,但两者降毒能力并无显著差异(P>0.05)。其联合作用也有较好降毒效果,与两菌株单独作用无显著差异(P>0.05),不同基质对其联合降毒作用影响不大(P>0.05)。新的T-2毒素降解菌的发现为进一步探明T-2毒素降解基因和开发T-2毒素生物降解酶提供了研究基础。建立高效液相色谱与多级质谱联用技术(LC-MS/MS)同步定量检测对虾血液、头部、肌肉、外壳、肝胰腺和肠道中的T-2与HT-2毒素方法。所建立方法通过选择性、线性、准确度、精密度、最低检出限和最低定量限确证,结果显示,样本中内源性物质不干扰目标物的测定,选择性良好;不同基质条件下线性相关系数(r2)均大于0.999;T-2毒素高中低浓度在不同部位的回收率在86.38%112.49%之间,HT-2毒素的回收率在84.29%106.23%之间,均满足80%120%的范围内;T-2的相对标准偏差在1.95%9.03%间,HT-2的相对标准偏差在1.21%10.11%间,不超过15%。本实验建立的方法灵敏度高选择性好并且为国内外首次建立的用LC-MS/MS检测以对虾不同部位为基质的T-2与HT-2毒素同步检测方法。采用探针剂量法测定、移动平均法推算凡纳滨对虾的半数致死剂量(LD50值)。得到24h内T-2毒素在凡纳滨对虾体内的半数致死剂量为30mg/kg BW。用灰色关联度分析方法找出急性染毒条件下对虾各部位毒素分布与剂量和对虾存活时间的关联情况。结果显示与染毒剂量关联度从大到小前三位依次为头部T-2、肝胰腺T-2和肠道HT-2;与染毒对虾存活时间关联度由大到小排前三位的依次为肠道HT-2、肝胰腺T-2和肝胰腺HT-2。所以染毒剂量与对虾免疫器官中毒素原形含量紧密相关,存活时间与对虾消化器官中T-2毒素的代谢产物含量关系密切。以3mg/kg BW T-2毒素对凡纳滨对虾肌肉注射染毒,染毒后选取不同时间点取样,用LC-MS/MS方法定量检测染毒虾血液中目标毒素浓度,用药代动力学软件3p97分析处理数据,得到T-2毒素血液浓度-时间数据符合权重为1/c2的三室模型,主要代谢动力学参数为k12:0.00min-1;k21:9.66×10-2min-1;k13:5.14×10-2min-1;k31:1.41×10-3min-1;k10:4.54×10-2min-1;t1/2π:7.10min;t1/2α:7.17min;t1/2β:1.06×103min;AUC:6.01×104ng·min·g-1;CL(s):5.00×10-5mg·(kg·min-1)-1·(ng·g-1)-1;Vc:1.10×10-3(mg·kg-1)(ng·g-1)-1。检测虾体各部位毒素分布情况,得出毒素在对虾体内的分布规律。按定期递增量法进行机体耐受性和蓄积性研究,通过蓄积系数K来评价蓄积作用强弱,并判断对虾在小剂量长期染毒情况下是否出现对T-2毒素的耐受性。在上述研究基础上设定染毒剂量组和方法,检测目标毒素在凡纳滨对虾血液、肌肉、肝胰腺、肠道、外壳中的蓄积量。按定期递增剂量法染毒对虾后分析其组织病理学变化情况。根据结果计算得到蓄积系数K=0.85<1,表明T-2毒素在凡纳滨对虾体内高度蓄积。凡纳滨对虾对T-2毒素无明显耐受。在口服T-2毒素剂量为0.5、1.5、4.5、13.5mg/kg的染毒饲料20d后,用LC-MS/MS方法检测血液、头部、肌肉、外壳、肝胰腺和肠道中T-2或HT-2毒素,结果显示均未检出。定期递增剂量法饲喂凡纳滨对虾后第八天肠道、肝胰腺和肌肉样品病理切片显示出现不同程度病变。表明T-2毒素在凡纳滨对虾体内有功能蓄积,并可能以隐蔽态形式存在。本研究为T-2毒素在凡纳滨对虾体内的毒性评价提供了具体参数,通过T-2毒素在凡纳滨对虾体内有强蓄积性的判断但未检测到游离态毒素的实验结果提出在对虾中T-2毒素以隐蔽态形式存在的猜想,为进一步隐蔽态T-2毒素的研究奠定了基础。