【摘 要】
：
从构建的大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库中筛选到Avg1(基因登录号为AY302573)完整cDNA克隆,为一新的CB相关基因.CB为溶酶体内一种重要的半胱氨酸内切蛋白水解酶,具有广谱的蛋白酶
论文部分内容阅读
从构建的大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库中筛选到Avg1(基因登录号为AY302573)完整cDNA克隆,为一新的CB相关基因.CB为溶酶体内一种重要的半胱氨酸内切蛋白水解酶,具有广谱的蛋白酶活性,参与机体多种肿瘤细胞浸润转移等多种生理和病理过程,因此越来越受到人们的广泛关注.该实验根据Avg1cDNA序列特点,设计合成引物(AvgS,AvgX),提取大腹园蛛主壶腹腺总RNA并以此为模板,RT-PCR方法扩增Avg1cDNA去除信号肽的部分序列(Avg),将目的片段Avg与原核表达载体pET-28a(+),pET-20b(+)分别用EcoR I,Nco I酶切处理,回收纯化后,连接构建两个重组载体,转化克隆宿主菌Ecoli DH5a中,经酶切及PCR鉴定为阳性克隆后进一步测序鉴定,结果碱基、预测氨基酸序列均与Avg1(去除信号肽)100﹪一致,并具有正确的读码框,获得的重组质粒Avg-28a、Avg-20b可以用于下步表达.大量提取重组质粒Avg-28a、Avg-20b,将其转化到表达宿主菌Ecoli BL21(DE3)中,鉴定为阳性克隆后,用IPTG 37℃诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,Avg-28a-DE3在近36kDa处出现了明显的表达带,其大小与预计分子量(35459.13Da)相当,经薄层扫描表达外源蛋白量占全菌体蛋白总量的39.6﹪,且表达形式主要为包涵体,将表达的包涵体蛋白进行变性、复性处理后测定蛋白酶活性,未见明显的酶活性;而Avg-20b-DE3未出现明显的表达带,用RT-PCR方法检测到了Avg mRNA的转录.将Avg-20b-DE3诱导,超声波破菌后上清液测定蛋白酶活性,显示了明显的酶活性.制备包涵体蛋白,电洗脱纯化后,常规方法免疫吉戎獭兔,结束后颈动脉采血,经ELISA检测,呈明显的阳性反应.Western blot在36kDa处显示了特异蛋白结合带,Avg原核表达蛋白能够有效地刺激机体产生抗体,具有良好的免疫原性,为CB的进一步应用研究奠定了基础.
其他文献
中图分类号：G804 文献标识：A 文章编号：1009-9328（2015）02-000-02 摘 要 跳高、跳绳和跳远是日常生活中常见的体育活动事例，它们的变化即作机械运动的情况是比较复杂的，按照一般方法解决其力学问题的难度较大，需要运用模型法，仔细研究其对象的变化过程，充分考虑客观事物的本质属性，忽视次要的非本质属性，将复杂的事物或运动过程，用较简单的模型代替，达到预期目的。 关键词 跳高
本文简述了开放式数控系统的特点和目前开放式数控系统的主要形式。接着介绍开放式钻床数控系统的总体结构以及该系统软件的模块结构.最后在此基础上重点阐述该系统软件中每
中图分类号：G804 文献标识：A 文章编号：1009-9328（2015）02-000-02 摘 要 本文运用文献资料法和访谈法对柳州城市职业学院足球选项班学生以及选项教师进行调查，调查结果显示：高校足球选项学生运动损伤后有多样化的消极心理反应。这主要与学生的应激反应和心理准备有关。针对这一情况提出了损伤后心理康复治疗手段及措施。 关键词 运动损伤 心理治疗 足球 一、前言 运动损伤是指
本文针对当前我国正在蓬勃发展的郊游、农家乐、休闲潮流这一现象，通过了解城市居民的游憩需求及游憩满意度，与国外的城市居民休闲活动种类、数量、参与度、历史与现状、发展趋
中图分类号：G804 文献标识：A 文章编号：1009-9328（2015）02-000-01 摘 要 小学生是祖国的未来，小学生的发展与国家未来的前途与命运紧紧相连，因此必须注重小学生的身心健康。然而当下我国普遍存在小学生体质下降问题，形式十分严峻，必须立即解决。本文运用文献资料、逻辑分析等方法对小学生体质下降现象进行探究，找出影响小学生体质下降的主要因素，并对小学生体质下降这一问题提出了科学
一、选用良种，合理布局我省应继续推广杂交油菜秦油2号、郑杂油1号、优质杂交油菜华杂3号等，重点安排在单季稻、杂交稻制种田以及旱地上种植。沿江棉区种植杂交油菜实行两育两
中图分类号：G861 文献标识：A 文章编号：1009-9328（2015）02-000-02 摘 要 本文章主要根据不同游泳姿势与不同游泳距离，在运动特点以及选材侧重等方面进行比较。在比较过程中有技术的对比、用力方向的对比、身体形态的对比、供能系统的对比。从而解释为何当今泳坛，某些优秀游泳运动员能够兼顾多项，而某些运动员则只能偏重一项的普遍局面。 关键词 运动员选材 蝶泳 仰泳 蛙泳 自由泳
壳斗植物是我国重要的森林树种，广泛分布于南北各省，其木材、树皮、果实及叶等均有重要的经济价值。研究它们的染色体核型，对于研究各属、种间的起源、系统发育、分类及杂交育种
本文首先对国内外栗属植物遗传多样性的研究进行了综述：目前国内外学者有关板栗遗传多样性研究主要集中在下述领域：①栗属植物地理分布及起源学说；②中国板栗的群体遗传多样性；③
中图分类号：G804 文献标识：A 文章编号：1009-9328（2015）02-000-01 摘 要 众所周知，运动损伤是影响运动员系统训练的重要原因。离心力量训练对于预防运动损伤、提高肌肉最大力量和快速力量、改善运动成绩等方面都有积极的作用。本文采用观察法与实验法，招募足球专项受试者20人，针对其踝关节屈伸肌群的肌肉力量进行训练。结果发现，经过为期6周的向心结合快速离心训练后，受试者踝关节周