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目前竹叶提取物(Ehl971)的主要质控指标是以硝酸铝～亚硝酸钠比色法测定的总黄酮糖苷含量（以芦丁为标准）。为了建立与国际接轨的高标准质控体系，必须运用高效液相色谱（HPLC）技术对Ebl971中主要的黄酮碳苷进行定量，首先面临的是标准品的分离、纯化和结构鉴定。本研究采用高速逆流色谱（HSCCC）对Ebl971中的黄酮进行组分分离，接着用制备型高效液相色谱（PHPLC）纯化黄酮单体，然后用液相色谱～质谱联用（LC～MS）技术对单体进行结构鉴定。同时采用溶出伏安法对Ebl9971中的微量元素进行检测。研究结果分述如下： 1、经过对6组两相溶剂系统的分析测试，选择以石油醚：正丁醇：水（1：4：5）作为HSCCC的溶剂系统，其分层时间为25s，上下相体积比为0.96。两种主要竹叶碳苷黄酮在该溶剂系统上、下相中的分配系数分别为3.80和4.44。 2、以此溶剂系统的上相为固定相、下相为流动相，当HSCCC仪转速为800rpm，流动相流速为2.25ml／min，Ebl971进样量为103mg时，3小时内就可有效地将试样中的黄酮类化合物分成六个馏分，其中最主要的馏分—5号峰经HPLC检测，发现含两种主要的竹叶碳苷黄酮。 3、利用制备型反相高效液相色谱，对5号峰进一步分离纯化。色谱条件为：Beckman Ultrasphere TM ODS柱（10mm i.d．×250mm，5μm），柱温：30℃，流速：1.0ml／min，进样量：100μL，UV检测波长：330nm，PDA扫描波长范围：190～600nm，制备得到两个单体。其紫外光谱图都具有黄酮类化合物所特有的吸收带Ⅰ（300～400nm）和带Ⅱ（240～285nm），且两吸收峰的相对强度也符合黄酮类化合物特征。 4、利用LC～MS联用技术对所得的两个黄酮单体进行结构鉴定，测得其分子量均为448，带Ⅰ的紫外吸收相同，带Ⅱ有显著差异。经与美国Indofinechemical公司的HPLC级标准品对照，证实分别是荭草苷（8-C-葡萄糖-木犀草素）和异荭草苷（6-C-葡萄糖-木犀草素）。 5、经多次探索发现，运用1.5次微分的溶出伏安法，在0.01mol／L醋酸钠～0.045mol／L酒石酸氢钾介质（pH=5.78）中，镉、铅、锌和铜离子都能产生灵敏的氧化波，四种离子在10-8-10-6mol／L之间均具有良好的线性关系。将此法应浙江人学硕士学位论文 徐维妞：色谱坟术和伏安法在竹叶提取物成分分伍中的应用研究用于 Ebl971中微量元素的分析测定，得干基含量为：铅二 （．69士 0．057）pg冶，锌＝（6．09士0．567）k＊g；变异系数分别为3．38％和9．31％：回收率分别为84．7％～108％，锌85．2％～105％；而Ebl。，I中的铜和铜离子几乎狈不出。 研究表明，将HSCCC和PHPLC有机绢合，可以从Ebl971中快速、高效地分离纯化黄酮单体，且能达到百毫克级的水平，为竹叶黄酮标准品的制备开拓了一条有效途径，并为竹叶提取物高标准质控体系的建立奠定了基础。同时，本研究得出的溶出伏安法测定竹叶提取物中的微量元素，具有样品处理简单、灵敏度高、快速简便。干扰小、设备投资省等优点，适宜在生产实际中推广使用。