论文部分内容阅读
Dishevelled(DVL/DSH)蛋白在果蝇中被首次发现。目前研究发现,在脊椎动物(包括哺乳动物)基因组中该基因具有Dvl1、Dvl2、Dvl3三种亚型,分别编码DVL1、DVL2、DVL3三种蛋白。它们均具有DIX、DEP、PDZ三个长度不等进化非常保守的结构域。在果蝇体内,散乱蛋白(DVL/DSH)与细胞内β-catenin蛋白动态平衡以及Wnt/β-catenin信号途径中某些基因的转录表达有关。随着研究人员对Wnt信号转导途径愈加成熟的探究显示:生物体内的散乱蛋白(DVL/DSH)对于Wnt信号转导途径是不可或缺的组成部分。在Wnt信号转导途径中,DVL是一种连接受体和某些下游信号因子的支架蛋白。 在本论文中,我们主要以金鱼中的Dvl3基因为研究对象。我们先采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)克隆技术获得金鱼Dvl3基因的cDNA全长,再分别利用半定量RT-PCR技术和蛋白免疫印记(Western Blot)技术分析研究Dvl3基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达差异。结果显示:(1)Dvl3基因在金鱼中cDNA全长具有2063个碱基,CDS区具有1878个碱基,编码一个包括626个氨基酸的蛋白质。将金鱼与其它物种的DVL3氨基酸序列进行对比,结果显示:人与其同源相似度是61.3%,非洲爪蟾与其相似度是61.8%,小鼠与其相似度是64.5%,斑马鱼与其相似度是83.8%。可以看出相似度比值都较高,表明在进化过程中金鱼Dvl3基因中拥有较高保守性。(2)经过半定量RT-PCR的分析,证明了在不同组织中的mRNA表达水平上,Dvl3基因在金鱼卵巢中表达量最高,大脑次之,在心脏、鳃、肾三种组织中的表达水平相对较高,鳍、肌肉、精巢在mRNA水平上的表达相对较低,肝脏中表达最低。在金鱼的十二个胚胎发育时期,在心跳期表达最强,在出膜期中的表达次之,多细胞、囊胚、原肠胚、神经胚、视原基、脑泡、肌肉效应、体色素及两细胞时期表达较高,眼色素时期表达最低。据此可推测Dvl3基因在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能起多种重要的作用。(3)提取金鱼七个胚胎发育时期和七种不同组织蛋白,在蛋白水平上,通过半定量Western Blot技术分析得出:在金鱼的7个胚胎发育时期,Dvl3基因在囊胚期表达最强,在视原基时期的表达次之,神经胚、肌效、眼色素、体色素表达相对较高,心跳期表达最低。在金鱼的7种组织中,在卵巢中表达最强,在肝脏中表达次之,大脑、精巢中表达相对较低,鳍、鳃、心脏中没有表达。由此可见散乱蛋白Dvl3在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能行使不同的功能,但其具体的功能及机制还有待进一步研究。以上结果为我们研究低等脊椎动物中Dvl3基因在Wnt信号转导途径中的具体调控机制奠定了重要的基础。