柑桔珠心苗、合子苗及品系的RAPD鉴定

来源 :浙江农业大学 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jjxjt
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该研究采用RAPD标记,用柑桔一个杂交组合的三个实生后代及二组芽变系进行了RAPD鉴定.采用陈大明方法和Cheng F.S方法分别对柑桔幼叶、成熟叶片和枝梢韧皮部提取基因组DNA,经苯酚一氧仿和Voglstein B.方法纯化,发现采用陈大明法提取幼叶的DNA和Cheng F.S法提取成熟叶片的DNA适于RAPD反应的要求,但用Cheng F.S法提取枝梢韧皮部DNA进行PCR反应,没有扩增.从50个引物中筛选12个引物在刘本整(刘勤光×本地早)×代代及三个实生苗后代能扩增出清晰带型,有11个引物能在父母本上扩增出明显差异,1个引物在父母本差异不明显.在这12个引物中,有9个引物扩增的带型3个子代之间完全一致,且与母本带型相同,3个子代都没来自父本的特异扩增带,因而可以肯定此三株是珠心苗,但有2个引物(S202、S238)扩增的带型在三子代之间不完全相同.在50个引物中筛选出38个引物和37个引物分别能在脐橙与葡萄柚上扩增出带型,其中有13个引物能在朋娜、大三岛脐橙上扩增出多态性,差异带共17条,有5个引物在星路比、马叙葡萄柚上扩增出差异,差异带11条.该实验还对在星路比、马叙上扩增有差异的S217、S250等引物进行了重复性实验,结果表明S217、S250的重复性好.该文就是柑桔基因组DNA提取方法、模板DNA浓度对扩增的影响,RAPD技术在珠心苗与合子苗及芽变品鉴定上的应用和RAPD重复性问题进行了讨论.该文研究将RAPD技术应用于柑桔珠心苗、合子苗及品素鉴定方面,在国内尚属首次.提出了RAPD技术在该方面研究的可行性,为柑桔杂交育种后代的早期鉴定和品系鉴定,提供了一种新的分子标记,对今后用RAPD技术在这方面的应用提供了重要的借鉴作用.
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