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目的：结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,根据中国卫生部2002年报告,结直肠癌发病率已跃居恶性肿瘤第三位,根据上海市疾病预防控制中心报告,2003年起结直肠癌发病率已跃居上海市区恶性肿瘤第二位。30一40%结直肠癌患者最终死于复发转移,因此早期诊断与治疗对于提高结直肠癌生存率尤为关键。近年来,众多研究者应用各种高通量组学技术(基因组学、转录组学、蛋白组学、表遗传组学和代谢组学等)试图寻找新的肿瘤预测以及预后分子生物学指标,然而,不同研究结果差异很大,可重复性差,迄今尚未找到公认的具有临床应用价值的预后分子指标。本研究在甲基化芯片初筛结果之上,试图寻找具有预后判断价值的新结直肠癌分子标记物,以提高结直肠癌预后判断的准确性,指导患者的个体化治疗.材料与方法：细胞株：从上海中科院细胞室获取三株生长良好的肠癌细株HCT116,RKO,SW480组织标本：获取96例手术后的结直肠癌新鲜组织标本,其中54例具有配对癌旁正常粘膜组织。所有标本均来自2008年12月-2010年3月复旦大学附属肿瘤医院/上海市肿瘤医院大肠外科,且均保存在-80度液氮中,其中提取RNA的组织均为RNALater保存,所有病人均签署过知情同意书,而且术前均未行新辅助化疗/放疗。病理分期严格按照AJCC(美国癌症联合委员会)分期第七版,此项研究经复旦大学附属肿瘤医院伦理委员会讨论并审核通过.芯片初筛：大肠外科蔡国响博士前期应用全基因组甲基化芯片(Illumina HumanMethylation27)筛选结直肠癌相关甲基化基因,发现miR-615等基因启动子CpG岛甲基化不仅具有致癌性,且与预后有关,从而为本研究提供候选的目标基因。实验方法：1采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测细胞株中基因miR-615启动子甲基化状态,对其中MSP阳性细胞株采用去甲基化试剂5-aza-2-CdR干预,分别采用定量甲基化(qMSP)和TaqMan定量PCR(qRT-PCR)检测miR-615甲基化水平和表达水平.2.在96例结直肠癌组织以及54例配对癌旁正常组织粘膜中提取DNA并亚硫酸氢盐修饰,采用定量甲基化(qMSP)方法检测基因miR-615启动子甲基化水平,对有RNAlater保存的56例癌组织和27例正常组织抽提RNA,采用TaqMan定量PCR (qRT-PCR)方法检测miR-615表达水平。数据分析：根据样本、标准品中目标基因以及内参基因实时定量甲基化PCR扩增的Ct值计算甲基化比例(percentage of methylated reference, PMR), PMR=100×(目标基因/内参)样本/(目标基因/内参基因)标准品,PMR<4定义为阴性结果(非甲基化),PMR≥4定义为阳性结果(甲基化)将每个样本目标基因CT值与内参CT值求delta CT值,将2-△Ct作为目标基因相对表达量..采用Pearson X2检验分析96例癌组织中miR-615基因甲基化与临床病理特征的关联性,配对卡方检验分析54对癌与癌旁甲基化差异,独立样本t检验分析56例癌甲基化与表达之间的关联性.采用配对t检验分析27对癌与配对正常组织之间miR-615表达差异,采用Kaplan-Meier和Log-rank检验分析甲基化与预后关系,所有检验均为双侧,P<0.5为有统计学意义.,所有检验均采用SPSS17.0软件包.结果：三株细胞株中,LOVO为MSP阳性,RKO和5W480为MSP阴性,去甲基化能重新激活miR-615表达.54例癌与配对的正常组织中,miR-615在癌组织中甲基化阳性率显著高于配对正常组织(P=0.002)；27对癌与配对的正常组织中,miR-615在癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P=0.047)；在56例癌组织同时行甲基化和表达的定量检测,独立样本t检验显示癌组织甲基化和表达呈显著负相关(p=0.042)；在85例Ⅱ、Ⅲ期根治术后结直肠癌中,甲基化和DFS显著相(p=0.029),高甲基化提示预后不良,但甲基化和OS没有显著性相关性(p=0.358).结论：在结直肠癌中,miR-615表达受甲基化调节,异常高甲基化具有致癌性,且在预测结肠癌患者预后中具有潜在的应用价值.