论文部分内容阅读
背景:肺癌是最常见的一种恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的重要原因之一,大约90%的肺癌患者死于肺癌转移而不是肺癌,而新生血管生成是肿瘤生长和转移的关键环节。肿瘤的无限制生长、组织浸润及周围组织与全身器官转移均依赖于血管生成,原位癌在无血管期的生长直径不超过2mm,并且该原位癌没有转移能力。当原位癌生长至直径达到2mm时,就需要新生血管的生成以提供足够的氧及营养物质使其继续生长。没有血管提供的氧和营养物质,原位癌就无法继续生长,而依然处于对宿主无害的状态,血管的生成使肿瘤的生长从没有血管的缓慢生长阶段变为有血管的快速生长阶段。因此,抑制原位癌的肿瘤血管生成就可显著的抑制肿瘤的生长和组织及器官转移。所以,以新生肿瘤血管为靶点,抑制肿瘤血管生成,阻断肿瘤细胞及肿瘤组织的氧和营养物质的来源及扩散通道,是抑制肿瘤组织生长以及组织器官转移的有效手段。蜂毒(Bee venom)是工蜂副腺和毒腺分泌出的一种透明液体,具有强烈刺激性气味、苦味和芳香气味,平时贮存于工蜂的毒囊中,于蛰刺时由蛰针排出。多方面研究表明蜂毒及针灸均对肿瘤有抑制作用。目的:本研究通过应用蜂毒干预,以lewis肺癌细胞为靶细胞,结合c57bl/6j小鼠实验,测量并计算lewis肺癌小鼠移植瘤体积、瘤重、抑瘤率、肿瘤血管数目,解剖显微镜下观察肺癌小鼠肺脏转移结节数,检测酪氨酸2(januskinase2,jak2)、磷酸化的酪氨酸2(phosphorylation-januskinase2,p-jak2)、转录因子3(signaltransducerandactivatoroftranscription,stat3)、磷酸化的转录因子3(phosphorylation-signaltransducerandactivatoroftranscription,p-stat3)、细胞因子信号抑制物3(suppressorofcytokinesignaling,socs3)、缺氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1,hif1α)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,vegf)的表达情况,从jak2/stat3信号通路的角度探讨蜂毒穴位注射抑制肺癌肿瘤血管生成及转移的具体作用机制。方法:建立lewis肺癌荷瘤小鼠模型,第7天,当c57bl/6j小鼠瘤体生长至最大径为0.5~0.7cm时,将其随机分5组,每组10只,其中模型组经腹腔注射0.1ml生理盐水,贝伐单抗组经腹腔注射0.1ml(0.22mg)贝伐单抗,蜂毒非经穴注射组于小鼠前肢上非经非穴处注射蜂毒0.1ml(0.04mg),蜂毒穴位注射组分别于小鼠合谷、尺泽穴位注射蜂毒0.025ml(每穴0.01mg,共0.04mg),每日1次,共17天。治疗期间,每3天测量小鼠体重和瘤体大小,第24天麻醉取材,称量瘤重、计算肺表面转移结节数,he染色后在光学显微镜下观察肺组织的组织学改变,采用免疫组化法检测肿瘤组织中cd34阳性的表达而后计算肿瘤血管密度,westernblot法、rt-qpcr法检测肿瘤组织中jak2、p-jak2、stat3、p-stat3、socs3、hif-1α及vegf的表达。结果:肿瘤体积及瘤质量,贝伐单抗组、蜂毒非经穴组,蜂毒穴位注射组明显低于模型组(p<0.05),肿瘤体积及瘤质量蜂毒穴位注射低于蜂毒非经穴组(p<0.05)。解剖显微镜下计数肺上转移结节,贝伐单抗组、蜂毒非经穴组及蜂毒穴位注射组明显低于模型组(p<0.05),肺上转移结节数蜂毒穴位注射低于蜂毒非经穴组(p<0.05)。免疫组化法检测肿瘤微血管密度,贝伐单抗组、蜂毒非经穴组及蜂毒穴位注射组明显低于模型组(p<0.05),肿瘤微血管密度蜂毒穴位注射低于蜂毒非经穴组(p<0.05)。rt-qpcr法检测p-jak2、p-stat3、hif-1α、vegf蛋白表达,贝伐单抗组、蜂毒非经穴组及蜂毒穴位注射组明显低于模型组(p<0.05),蜂毒穴位注射组明显低于贝伐单抗组(p<0.05),蜂毒穴位注射组明显低于蜂毒非经穴组(p<0.05),p-jak2、p-stat3、hif-1α、vegf蛋白表达蜂毒穴位注射组与贝伐单抗组无明显差异(p<0.05);socs3蛋白表达,贝伐单抗组及蜂毒穴位注射组明显高于蜂毒非经穴组及模型组(p<0.05),蜂毒穴位注射组明显高于贝伐单抗组(p<0.05),蜂毒穴位注射组明显高于贝伐单抗组(p<0.05),socs3蛋白表达蜂毒非经穴组与模型组无明显差异(p>0.05)。实时荧光定量pcr检测hif-1α、vegfmrna的表达,贝伐单抗组、蜂毒非经穴组及蜂毒穴位注射组明显低于生理盐水组(p<0.05),hif-1α、vegfmrna的表达蜂毒穴位注射组明显低于蜂毒非经穴组(p<0.05),hif-1α、vegfmrna的表达蜂毒穴位注射组与贝伐单抗组无明显差异(p>0.05);SOCS3mRNA的表达,贝伐单抗组及蜂毒穴位注射组明显高于蜂毒非经穴组及生理盐水组(P<0.05),SOCS3mRNA的表达蜂毒穴位注射组明显高于贝伐单抗组(P<0.05)。结论:蜂毒穴位注射能抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤血管生成及转移,其作用机制与抑制JAK2/STAT3信号传导有关。