目的：用分子信标荧光定量PCR技术检测志贺菌ipaH基因。 方法：根据GenBank上公布的福氏志贺菌M32063株ipaH基因序列，设计两对引物和一条分子信标探针。选取4株志贺菌标准菌株及大肠杆菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌、链球菌，4种细菌作阴性对照，进行志贺菌ipaH基因特异性扩增；根据扩增结果及序列分析结果，选定福氏志贺菌M32063株ipaH基因序列第1236—1806位核苷酸目标序列，进行特异性扩增，提取纯化产物；将纯化好的PCR产物连接到pGEM-T载体上，得到pGEM-T-ipaH重组克隆载体；扩增pGEM-T-ipaH重组质粒的菌液，送生物技术公司测序，与GenBank上公布的福氏志贺菌M32063株ipaH基因进行核苷酸序列的比对；用无菌水按照10的倍数方法稀释pGEM-T-ipaH重组质粒，并得到梯度浓度的pGEM-T-ipaH重组质粒；取不同浓度pGEM-T-ipaH重组质粒作模板进行PCR及real-time PCR，根据实验需要，选择不同退火温度、Mg²⁺浓度、探针浓度，最终得出优化后的real-time PCR反应条件；随后进行灵敏度分析、构建阳性标准品、通过拷贝数与Ct值之间的线性关系，制定标准曲线；收集20份未知临床腹泻患者粪便样本，进行分子信标荧光定量PCR技术检测志贺菌ipaH基因，为验证实验的可靠性，同时采用荧光终点法对20份未知临床腹泻患者粪便样本进行荧光值测定。 结果：本实验得出结果如下： 1．贺菌ipaH基因采用P1、P2和P3、P4两对引物，分别成功扩增出571bp和150bp片断，电泳结果显示特异性好、灵敏度高。 2．福氏志贺菌ipaH基因片断导入载体菌后，经过测序证实与NCBI基因序列的同源性为99％。说明实验用重组质粒中含有ipaH基因571bp的片断，可以作阳性标准品构建阳性模板。 3．选择不同的退火温度、Mg²⁺浓度、探针浓度，优化real-time PCR反应条件。 4．本实验以10的倍数系列稀释标准品为模板，P3、P4为上下游引