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腺苷脱氨酶是一种与机体免疫系统有重要联系的核酸分解代谢酶类,可特异性催化腺苷产生不可逆的脱氨反应。通过测定单位时间内底物的减少量或生成物的增加量,建立了腺苷脱氨酶活性的三种检测方法。通过正交设计与单因素试验相结合,确定了酶活性测定的最佳条件。用于临床检验,结果满意。 四酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性 本方法在ADA催化腺苷水解生成氨和次黄(嘌呤核)苷反应的基础上,再依次偶联三个酶促反应,次黄苷经嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)催化水解生成次黄嘌呤,再经黄嘌呤氧化酶催化氧化产生H2O2,最后经过氧化物酶(POD)催化的Trinder反应产生红色醌类化合物。通过测定500nm处吸光度的上升速率(△A/min)即红色醌类化合物生成速率来测定ADA活性。新建立的四酶偶联法既能用于手工操作,又能用于自动生化分析仪的ADA检测。在pH7.40,底物溶液中腺苷和PNP,显色剂中苯酚、POD和XOD浓度分别为6.00×10-3mol/L、42U/L、1.50g/L、5500U/L、20U/L时,酶显示最大活性。方法的线性范围为0~120U/L。手工操作法的批内、批间相对标准偏差分别为1.59%~2.22%、1.96%~3.10%;全自动法的批内、批间相对标准偏差分别为1.55%~2.18%、1.85%~2.93%。用手工操作和自动生化分析仪测定同一样本,经配对t检验,差异无显著性意义(P>0.05)。 双酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性 本方法在ADA催化腺苷脱氨反应的同时,偶联一个α-酮戊二酸在还原剂NADH作用下经谷氨酸脱氢酶(GLDH)催化的氨化还原反应。本研究采用全自动分析方法,通过测定340nm处吸光度的下降速率