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目的: 采用生物信息学分析系统预测与GLS表达相关的microRNA(miRNA)，并构建miRNA真核表达载体和颗粒溶素(Granulysin，GLS)基因3-非编码区(3-untranslated region，3-UTR)-萤火虫荧光素酶报告载体，通过双荧光素酶实验筛选与GLS3-UTR表达相关的miRNA;将筛选出的miRNA包装入病毒并稳定感染THP-1细胞以获得稳定表达系THP-218和THP-NC，用佛波酯(phorbol12-myristate13-acetatefor,PMA)诱导两种细胞并检测GLS的表达，进一步验证mir-218对内源性GLS表达的影响。 方法: 1.用生物信息学分析软件预测可能与GLS基因3-UTR作用的miRNA(mir-218、mir-514、mir-185、mir-611)并构建5种miRNA真核表达质粒（分别表达mir-218、mir-514、mir-185、mir-611和mir-control），同时构建携带有GLS基因3-UTR序列的萤火虫荧光素酶报告质粒pGLS-3UTR;分别将不同miRNA真核表达质粒、pGLS-3UTR和pRL-TK（表达海肾荧光素酶）共转染293T细胞，48小时后，测定各组萤火虫和海肾荧光素酶活性，为防止脱靶效应，同时转染 anti-mir-inhibitor，筛选出与GLS3-UTR相关的miRNA。 2.用PMA（终浓度为160riM）诱导THP-1细胞，分别培养12h、24h和48h后，提取细胞总RNA和蛋白质。RT-PCR分别检测培养12h、24h和48h后THP-1细胞中GLS基因mRNA的表达并测序鉴定;Western blot检测24h和48h后THP-1细胞中GLS蛋白的表达;免疫细胞化学法观察PMA作用THP-1细胞48h后GLS蛋白的表达。 3.用慢病毒LV3-mir-218和LV3-mir-control分别感染THP-1细胞，通过慢病毒载体上的嘌呤霉素抗性基因筛选获得稳定细胞系THP-218和THP-NC; PMA分别诱导两组细胞表达GLS，48h后提取两组细胞的总RNA和蛋白质，RT-PCR、Western blot检测两组细胞中GLS mRNA和蛋白质表达量的差异。 结果: 1.生物信息学分析软件预测结果显示，mir-218、mir-514、mir-185、mir-611均与GLS基因3-UTR存在互补结合位点;构建的miRNA真核表达质粒和pGLS-3UTR经酶切及测序鉴定正确;分别将各组miRNA真核表达质粒、pGLS-3UTR及pRL-TK共转染293T细胞，双荧光素酶检测结果显示mir-218可使pGLS-3UTR表达的萤火虫荧光素酶降低75％左右(P＜0.01)，而其余miRNA均不能有效抑制其表达;转染anti-mir-218后，萤火虫荧光素酶的表达可回复到正常水平。 2.PMA诱导THP-1细胞24h后，RT-PCR法可检测到GLS基因 mRNA的表达，48h后，Western blot及免疫细胞化学法均可以检测到GLS蛋白的表达。 3.病毒感染后经嘌呤霉素筛选可获得稳定细胞系THP-218和THP-NC。经PMA诱导后，与THP-NC细胞相比，THP-218细胞内源性GLS蛋白表达下降约55％(P＜0.01)，而GLS mRNA未发生变化。 结论: 1.生物信息学方法预测出4条与GLS3-UTR相关的miRNA。成功构建了miRNA真核表达质粒和GLS基因3-UTR萤火虫荧光素酶报告质粒，并筛选出和GLS相关的miRNA（mir-218）。 2.PMA可激活人单核白血病细胞THP-1中GLS的表达。 3.Mir-218可在转录后水平干扰内源性GLS的表达。 该研究初步证实miRNA可抑制THP-1中GLS表达，为进一步探讨miRNA调控GLS表达的机制奠定基础;同时为miRNA用于结核病的防治提供新思路。