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茯苓是一味珍贵的药食两用菌,茯苓多糖是茯苓中一类具有广泛生理活性的物质,具有增强免疫力、抗肿瘤等诸多功效。随着分子生物学等学科的高速发展,多糖的诸多生物学功能被不断认识并研究,引起了人们的关注。本文利用液体发酵技术生产茯苓多糖;对多糖的发酵、提取工艺进行了优化;以发酵多糖为原料合成茯苓硫酸酯多糖,并对其结构进行了表征。本研究对茯苓多糖的工业化生产、扩大多糖及其衍生物的应用范用具有一定的现实意义。主要研究结果如下:1.以液体发酵获得的菌体生物量和多糖产量为指标,通过单因素试验,对碳氮源比例以及不同培养温度、转速、pH和接种量等条件进行了研究。经正交设计优化,最终确定了茯苓液体发酵的最优培养条件:碳源为葡萄糖、碳源浓度为4%、氮源为蛋白胨加硝酸钾、氮源浓度为1.5%、pH 5.5、装液量为80 mL/250 mL、转速150 rpm、温度26℃、pH5.5、接种量6%。2.利用单因素试验和响应面法优化了菌丝体多糖的提取工艺。结果表明:茯苓菌丝体多糖最佳提取条件为:提取时间为4.3h,提取温度为73.8℃,水料比为29.8∶1时,预测茯苓多糖提取率理论值达到2.45%,提取效果显著提高,R~2=93.66%,模型与实际试验拟合较好,自变量与响应值之间线性关系显著,可用于茯苓多糖提取试验的理论预测。并对产物进行了纯化,获得了组分单一的多糖。3.采用氯磺酸-吡啶法对提取的茯苓多糖进行硫酸酯化。通过比较吡啶与氯磺酸体积比、反应温度和反应时间等条件,优选出茯苓硫酸酯化多糖的最佳合成条件,得到取代度为0.68的茯苓硫酸酯多糖,并对其进行理化性质的鉴定。利用紫外光谱法和红外光谱法对茯苓硫酸酯多糖的结构进行了表征,结果表明合成产物有硫酯键。经柱层析和琼脂糖凝胶电泳鉴定,硫酸酯化产物的分子量大约在:5.4×10~3 Da。本文合成的茯苓多糖硫酸酯,成分均一、分子量较小,可用于抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、调节免疫等领域的研究。